血凝素基因(HA)编码的血凝素是构成流感病毒囊膜纤突的主要成分。成熟的血凝素包含HA1和HA2两个亚单位,其中HA1含有病毒与受体相互作用的位点。IgGFc基因片段(长度为717bp)编码人IgG抗体中的一段小肽,常作为融合蛋白标签。蛋白质分泌依赖于信号肽的引导,本研究中用信号肽IL-2SS代替HA自身信号肽,科研人员尝试构建IL-2SS/HA1/IgGFc融合蛋白表达载体,并导入大肠杆菌表达和分泌,请回答:

(1)流感病毒囊膜主要由 磷脂和蛋白质磷脂和蛋白质组成,囊膜上血凝素的合成场所在 宿主细胞的核糖体宿主细胞的核糖体。
(2)本实验用信号肽IL-2SS代替HA自身信号肽有利于 融合蛋白分泌到大肠杆菌细胞外融合蛋白分泌到大肠杆菌细胞外,PCR扩增目的基因时应该选择图中引物 b和引物cb和引物c设计引物时,不能包含基因HA1的终止密码子的编码序列,原因是 防止产生的HA上不含IgGFc标签防止产生的HA上不含IgGFc标签。
(3)应选择限制酶 EcoRVEcoRV来切割质粒A,然后直接将PCR产物与质粒A混合,同时加入 T4DNA连接T4DNA连接酶,使得目的基因与质粒A相连。
(4)若目的基因与质粒A正向连接,HA1基因转录时的模板链是由图中的引物 cc(填“a”、“b”、“c”或“d”)在PCR时延伸而成;若目的基因与质粒A反向连接,用BamHⅠ和SacⅠ同时切割重组质粒,完全酶切后的产物进行凝胶电泳,其中最靠近加样孔的条带长度约为 51815181bp。
(5)融合蛋白中的标签蛋白有利于目的蛋白的分离和纯化,基因工程生产HA1作为疫苗时,选择人IgGFc作为标签的优点还有 降低免疫排斥反应降低免疫排斥反应。
【答案】磷脂和蛋白质;宿主细胞的核糖体;融合蛋白分泌到大肠杆菌细胞外;b和引物c;防止产生的HA上不含IgGFc标签;EcoRV;T4DNA连接;c;5181;降低免疫排斥反应
【解答】
【点评】
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发布:2024/6/27 10:35:59组卷:32引用:1难度:0.6
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