19世纪末，巴斯德开创了第一次疫苗革命，其特点是接种灭活或减毒的病原微生物。20世纪70年代开始，现代生物技术的迅猛发展开创了第二次疫苗革命，使疫苗的研制进入分子水平。图1是通过基因工程制备乙型肝炎表面抗原（HbsAg）从而获得乙肝疫苗的过程。
在图1步骤①和③中，需要用合适的限制酶切割乙肝表面抗原基因和质粒。现将乙肝表面抗原基因及质粒的部分限制酶的识别序列及位置表示为图2。质粒中的启动子是质粒中基因得以正常表达所必需的部分。LacZ基因合成某种酶，该酶能将无色染料X-gal变成蓝色，最终能在含无色染料X-gal的培养基上将含该基因的菌落染成蓝色。
| 限制酶 | EcoRⅠ | BclⅠ | BamHⅠ | HindⅢ |
| 识别序列及切割位点 | 5'-G↓AATTC-3' | 5'-T↓GATCA-3' | 5'-G↓GATCC-3' | 5'-A↓AGCTT-3' |
人工合成
人工合成
的方法中获取。（2）构建基因表达载体时，常选择质粒作为运载体，这是因为质粒具有
具有较小的分子量
具有较小的分子量
等特点（至少答出1点）。一个基因表达载体的组成，除了目的基因和复制原点，还必须有启动子、终止子
终止子
（至少答出1个）。（3）构建基因表达载体时，切割质粒选用的限制酶是BamHⅠ和HinlⅢ，切割乙肝表面抗原基因选用的限制酶是
BclⅠ
BclⅠ
和 HindⅢ
HindⅢ
。与只用一种限制酶相比，这样操作的优势是 避免自身环化
避免自身环化
及便于筛选。在图1步骤④中，使用的基因工程工具酶是 DNA连接酶
DNA连接酶
。（4）为筛选含有乙肝表面抗原的大肠杆菌细胞，需要将导入操作之后的大肠杆菌接种到含
氨苄青霉素
氨苄青霉素
和无色染料X-gal的固体牛肉膏蛋白胨培养基上，挑选 白色或未被染成蓝色
白色或未被染成蓝色
（填“颜色”）的菌落纯化培养。（5）若运用PCR技术检测乙肝表面抗原基因是否导入，需根据
目的基因
目的基因
的序列设计PCR引物，利用待检DNA为模板进行PCR、PCR过程包括多次循环，每个循环分为3个步骤：①变性、②复性
复性
、③延伸。（6）乙肝表面抗原基因导入受体细胞后，常用
抗原—抗体杂交技术
抗原—抗体杂交技术
技术检测乙肝表面抗原在大肠杆菌中是否成功表达。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】人工合成；具有较小的分子量；终止子；BclⅠ；HindⅢ；避免自身环化；DNA连接酶；氨苄青霉素；白色或未被染成蓝色；目的基因；复性；抗原—抗体杂交技术
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：39引用：1难度：0.3
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