蜘蛛丝是自然界中机械性能最好的天然蛋白纤维，其强度高于制作防弹衣的凯夫拉纤维，有广泛的应用前景。但如何大量获取蜘蛛丝的问题一直难以解决。2018年8月，中科院分子植物科学卓越创新中心利用基因工程技术成功在家蚕丝腺和蚕茧中大量表达蜘蛛丝蛋白。回答下列问题：
（1）构建基因表达载体时（如图所示），需要在目的基因前后两端分别引入 XbaⅠ和SacⅠXbaⅠ和SacⅠ的酶切位点，该方法比用同一种酶进行酶切的优势是 防止目的基因自身环化，防止目的基因反向连接防止目的基因自身环化，防止目的基因反向连接（答出一点即可）。
（2）利用PCR技术扩增蜘蛛丝基因前，需根据目的基因的核苷酸序列设计 22种引物，进行PCR时需加热至90～95℃然后冷却至55～60℃，此操作的目的是 使DNA解链，然后使引物结合到互补DNA链上使DNA解链，然后使引物结合到互补DNA链上。
（3）为能从蚕丝中提取蛛丝蛋白，基因表达载体中目的基因的首段必须含有使其仅能在蚕的丝腺细胞中特异性表达的 启动子启动子。当其与 RNA聚合酶RNA聚合酶识别和结合，才能驱动转录过程，最终翻译成功。
（4）在研究过程中，发现目的基因已经插入到蚕丝腺细胞染色体的DNA上，蚕丝中却未能提取到蜘蛛丝，请分析原因及检测方法 蛛丝蛋白基因未能正常进行转录，可用分子杂交技术检测，蛛丝蛋白未能进行正常翻译，可用抗原—抗体杂交技术检测蛛丝蛋白基因未能正常进行转录，可用分子杂交技术检测，蛛丝蛋白未能进行正常翻译，可用抗原—抗体杂交技术检测。
（5）研究人员发现若将蛛丝蛋白31号位的色氨酸替换为酪氨酸，蛛丝韧性可提高50%，此成果所用到的工程技术为 蛋白质工程蛋白质工程。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】XbaⅠ和SacⅠ；防止目的基因自身环化，防止目的基因反向连接；2；使DNA解链，然后使引物结合到互补DNA链上；启动子；RNA聚合酶；蛛丝蛋白基因未能正常进行转录，可用分子杂交技术检测，蛛丝蛋白未能进行正常翻译，可用抗原—抗体杂交技术检测；蛋白质工程
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：3引用：1难度：0.6
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
3．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
