金属硫蛋白（Metallothionein,MT）是由动植物和微生物产生的一类低分子量、富含半胱氨酸、具有金属结合能力的多肽，具有多种生物学功能。近年来，因其具有与Zn、Cu、Cd等重金属的较强结合能力，而用于生态修复。科研人员成功地将人MT蛋白基因用农杆菌转化法转入番茄，成功培育转基因番茄。回答下列问题：
（1）感受态农杆菌的制备：取保存的根癌农杆菌菌落用 接种环接种环接种于相应的液体培养基中，并置于 摇床摇床中进行振荡培养，完成菌种的活化和扩大培养；取适量菌液置于低浓度、低温低温的CaCl2溶液中处理，制得感受态农杆菌。
（2）MT目的基因的获取和转化：取人肝脏细胞破碎后提取mRNA，在逆转录酶的作用下形成cDNA，经PCR技术扩增后的产物分别与Ti质粒连接形成重组质粒（如图），将其与制备好的感受态农杆菌混合，最后进行短暂的 热刺激热刺激处理，使外源DNA转入细胞；经适宜条件培养一段时间，再加入适宜浓度的 卡那霉素卡那霉素筛选出转化的农杆菌。
（3）转化番茄：取番茄子叶进行 消毒消毒处理后切段，再与转化的农杆菌菌液进行共培养适宜时间，取出子叶放在 无菌滤纸无菌滤纸上吸取多余菌液，再将子叶放在适宜的以 MSMS培养基为基础配制的培养基中进行活化和除菌培养。
（4）育成转基因番茄：取上述处理的番茄子叶先经 脱分化脱分化过程形成愈伤组织，再经发芽和生根，最后经过 炼苗和移栽炼苗和移栽过程，育成成熟的番茄植株。
（5）转基因番茄性状的检测和生产应用：为了检测番茄中是否成功导入目的基因，可依据 T-DNA片段的（部分）序列T-DNA片段的（部分）序列设计引物进行PCR扩增，再用凝胶电泳技术进行检测，进行此实验的同时应以 未导入质粒的野生型番茄未导入质粒的野生型番茄作为阴性对照，以农杆菌Ti质粒的番茄作为阳性对照；已知某转基因番茄植物能大量吸收Zn、Cd等元素，且主要富集在根，生产应用时需对其定期拔除并实施无害处理，原因是 避免死亡后根等遗体被分解，锌再度返回土壤，造成二次污染；及时拔除植物后，缓解锌随食物链不断富集的危害避免死亡后根等遗体被分解，锌再度返回土壤，造成二次污染；及时拔除植物后，缓解锌随食物链不断富集的危害（答出2点即可）。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】接种环；摇床；低温；热刺激；卡那霉素；消毒；无菌滤纸；MS；脱分化；炼苗和移栽；T-DNA片段的（部分）序列；未导入质粒的野生型番茄；避免死亡后根等遗体被分解，锌再度返回土壤，造成二次污染；及时拔除植物后，缓解锌随食物链不断富集的危害
【解答】
【点评】
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发布：2024/8/3 8:0:9组卷：4引用：2难度：0.5
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
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