水蛭素是水蛭唾液腺分泌的一种蛋白质,是一种优良的凝血酶抑制剂,在血栓治疗上有着重要的医学价值。已知天然水蛭素的抗凝血活性较低,产量和来源有限,某科研团队拟通过一定的技术手段改造水蛭素基因,通过制备山羊乳腺生物反应器获得活性高、产量大的重组水蛭素。
回答下列问题:
(1)水蛭素基因的改造:研究发现,水蛭素的第47位天冬酰胺替换为赖氨酸,可以提高其活性。通过建立功能与结构的联系,运用 蛋白质蛋白质工程对水蛭素分子进行改造:从预期的水蛭素功能出发,设计水蛭素的 空间结构空间结构,推测出其氨基酸序列,再依据 中心法则/mRNA序列/核糖核苷酸序列中心法则/mRNA序列/核糖核苷酸序列推测出水蛭素基因的核苷酸序列,进而运用基因定点突变技术改造水蛭素基因。
(2)水蛭素基因表达载体的构建:应用PCR技术对改造后的水蛭素基因进行扩增,在设计引物时,应在引物5'端添加特定限制酶的识别序列,其目的是 便于将水蛭素基因与载体连接便于将水蛭素基因与载体连接。将水蛭素基因和表达载体用 限制酶、DNA连接酶限制酶、DNA连接酶酶处理获得重组DNA分子。
(3)山羊成纤维细胞的培养、转化:将无菌条件下采集制备的 雌性雌性(填“雌性”或“雄性”)山羊成纤维细胞悬液作为初始材料进行 原代原代培养。培养一段时间后,加入胰蛋白酶使细胞松散,当贴壁细胞趋于球形时加入过量新鲜培养液,目的是 终止(缓解)酶解反应终止(缓解)酶解反应。将带有重组DNA分子的脂质体与成纤维细胞共培养,获得含有目的基因的受体细胞。应用PCR技术可精准鉴定受体细胞中是否导入了水蛭素基因,若PCR反应出现无扩增条带的假阴性结果,可能的原因有哪几项?ABCABC。
A.反应温度不适宜
B.引物量不够
C.模板量不够
D.重组DNA未导入
(4)转基因奶山羊的克隆:将成功转化的成纤维细胞的核取出,移入去核的 卵母/卵/受精卵卵母/卵/受精卵细胞中,用电刺激后进行胚胎体外培养,将早期胚胎移植到经 同期发情同期发情处理的代孕母子宫内,经妊娠、分娩获得转基因克隆奶山羊。
(5)重组水蛭素的获取和检测:收集转基因奶山羊乳汁,从中提取得到 蛋白质蛋白质,分子水平上采用 抗原抗体杂交抗原抗体杂交技术鉴定是否含有重组水蛭素,最后使用离子交换层析实现重组水蛭素的 分离(纯化)分离(纯化)。
【答案】蛋白质;空间结构;中心法则/mRNA序列/核糖核苷酸序列;便于将水蛭素基因与载体连接;限制酶、DNA连接酶;雌性;原代;终止(缓解)酶解反应;ABC;卵母/卵/受精卵;同期发情;蛋白质;抗原抗体杂交;分离(纯化)
【解答】
【点评】
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发布:2024/6/27 10:35:59组卷:18引用:1难度:0.9
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