水蛭素是水蛭唾液腺分泌的一种蛋白质，是一种优良的凝血酶抑制剂，在血栓治疗上有着重要的医学价值。已知天然水蛭素的抗凝血活性较低，产量和来源有限，某科研团队拟通过一定的技术手段改造水蛭素基因，通过制备山羊乳腺生物反应器获得活性高、产量大的重组水蛭素。
回答下列问题：
（1）水蛭素基因的改造：研究发现，水蛭素的第47位天冬酰胺替换为赖氨酸，可以提高其活性。通过建立功能与结构的联系，运用 蛋白质蛋白质工程对水蛭素分子进行改造：从预期的水蛭素功能出发，设计水蛭素的 空间结构空间结构，推测出其氨基酸序列，再依据 中心法则/mRNA序列/核糖核苷酸序列中心法则/mRNA序列/核糖核苷酸序列推测出水蛭素基因的核苷酸序列，进而运用基因定点突变技术改造水蛭素基因。
（2）水蛭素基因表达载体的构建：应用PCR技术对改造后的水蛭素基因进行扩增，在设计引物时，应在引物5'端添加特定限制酶的识别序列，其目的是 便于将水蛭素基因与载体连接便于将水蛭素基因与载体连接。将水蛭素基因和表达载体用 限制酶、DNA连接酶限制酶、DNA连接酶酶处理获得重组DNA分子。
（3）山羊成纤维细胞的培养、转化：将无菌条件下采集制备的 雌性雌性（填“雌性”或“雄性”）山羊成纤维细胞悬液作为初始材料进行 原代原代培养。培养一段时间后，加入胰蛋白酶使细胞松散，当贴壁细胞趋于球形时加入过量新鲜培养液，目的是 终止（缓解）酶解反应终止（缓解）酶解反应。将带有重组DNA分子的脂质体与成纤维细胞共培养，获得含有目的基因的受体细胞。应用PCR技术可精准鉴定受体细胞中是否导入了水蛭素基因，若PCR反应出现无扩增条带的假阴性结果，可能的原因有哪几项？ABCABC。
A.反应温度不适宜
B.引物量不够
C.模板量不够
D.重组DNA未导入
（4）转基因奶山羊的克隆：将成功转化的成纤维细胞的核取出，移入去核的 卵母/卵/受精卵卵母/卵/受精卵细胞中，用电刺激后进行胚胎体外培养，将早期胚胎移植到经 同期发情同期发情处理的代孕母子宫内，经妊娠、分娩获得转基因克隆奶山羊。
（5）重组水蛭素的获取和检测：收集转基因奶山羊乳汁，从中提取得到 蛋白质蛋白质，分子水平上采用 抗原抗体杂交抗原抗体杂交技术鉴定是否含有重组水蛭素，最后使用离子交换层析实现重组水蛭素的 分离（纯化）分离（纯化）。
【答案】蛋白质；空间结构；中心法则/mRNA序列/核糖核苷酸序列；便于将水蛭素基因与载体连接；限制酶、DNA连接酶；雌性；原代；终止（缓解）酶解反应；ABC；卵母/卵/受精卵；同期发情；蛋白质；抗原抗体杂交；分离（纯化）
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：18引用：1难度：0.9
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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