碱性蛋白酶广泛应用于食品、医疗等行业。为了实现低成本高产量的目标，研究人员通过诱变技术获得高效分泌碱性蛋白酶的地衣芽孢杆菌，再利用基因工程手段将该地衣芽孢杆菌的碱性蛋白酶基因（Apr）导入大肠杆菌，构建了表达胞外碱性蛋白酶的重组菌株。回答下列问题：
（1）在诱变技术处理的过程中，地衣芽孢杆菌发生了 基因突变基因突变（填“变异类型”）。由于该种变异具有 不定向性不定向性的特点，故诱变后还需经过 筛选筛选才有可能获得高效分泌碱性蛋白酶的芽孢杆菌。
（2）Apr基因两端的核苷酸序列已知，如图1所示。利用PCR技术扩增Apr基因所需要的引物是下列中的 ABAB。
A．5′-GGATCTAACGCGATACGC-3′
B．5′-CTCGAGCCGGAAATACTT-3′
C．5′-AAGTATTTCCGGCTCGAG-3′
D．5′-GCGTATCGCGTTAGATCC-3′
（3）PCR扩增产物的电泳结果显示，除目的基因条带外，还有2条非特异条带，可能的原因有：①②①②（填序号），导致引物与模板中的非目的基因片段结合。
①引物序列较短
②引物和模板不完全配对
③复性温度过高
（4）构建基因表达载体时需要的工具酶有 限制酶、DNA连接酶限制酶、DNA连接酶。如图是2已构建的重组表达载体pET-28b（+）-Apr示意图，研究人员用XhoⅠ和NcoⅠ两种酶（酶切位点见图2，数字代表该位点与复制原点的距离）对重组菌株的DNA进行双酶切，若得到约为 11101110bp和 52315231bp的DNA片段，则初步表明目的基因已成功导入到大肠杆菌细胞内。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】基因突变；不定向性；筛选；AB；①②；限制酶、DNA连接酶；1110；5231
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：24引用：1难度：0.5
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1．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
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