转座子是指能从基因组的一个位置移动到另一个位置的DNA片段。Ac片段能编码转座酶，DS片段需在转座酶作用下，才可以从原来的位置上切离下来，然后随机插入到所在染色体的其他位置或其他染色体上。

（1）用

限制性核酸内切酶或者限制酶，DNA 连接

限制性核酸内切酶或者限制酶，DNA 连接

酶将DS片段构建在Ti质粒的T-DNA片段上，再用含有该重组质粒的农杆菌转化水稻，自交筛选获得DS-T-DNA纯合体（甲）。以同样方法获得Ac-T-DNA纯合体水稻（乙）。
（2）甲、乙杂交获得Ac/Ds双因子转座系统水稻，在其后代中筛选到一些淡绿叶突变体。利用淡绿叶突变体与野生型水稻进行系列杂交实验，

F₂或者子二

F₂或者子二

代获得野生型和淡绿叶水稻植株分别为442株和130株，分离比符合 3：1，初步推测淡绿叶突变是单基因的

隐

隐

性突变。将442株野生型植株单株收获和播种，后代发生性状分离的植株占

2

3

2

3

，则进一步确认上述推测。
（3）为进一步确定突变性状与Ds切离转座的相关性，设计6种引物（如图1），对上述572株子代的T-DNA进行Ds转座的PCR检测。
①检测原理：Ds未发生切离的DNA位点，通过引物

b 和 d

b 和 d

可得到400bp的扩增产物；Ds已发生切离的DNA位点通过引物c和d可得到870bp的扩增产物。
②扩增产物的电泳结果如图2，据此判断

B

B

类型为淡绿叶突变体。若A类型：B类型：C类型=

2：1：1

2：1：1

，则突变性状产生与Ds片段的切离转座有关。