大肠杆菌是水体中常见的微生物，经改造的大肠杆菌可用来检测制药厂排出的污水中某化合物X（一种遗传毒性杂质，可损伤细胞DNA，具有致癌可能）的含量。
（1）大肠杆菌在含有伊红—亚甲蓝的牛肉膏蛋白胨培养基中生长，菌落呈深紫色并有金属光泽，据此可用于检测污染水体中大肠杆菌的数量。上述培养基是否属于选择培养基 不属于不属于，说明理由 在牛肉膏蛋白胨培养基中很多细菌能正常生长繁殖，不能抑制或阻止除大肠杆菌之外的其他微生物的生长在牛肉膏蛋白胨培养基中很多细菌能正常生长繁殖，不能抑制或阻止除大肠杆菌之外的其他微生物的生长。
（2）图1中甲、乙、丙、丁是从微生物中分离到的可被化合物X激活的4种毒性响应基因启动子（箭头表示转录方向）；图2质粒中SPP基因的表达产物可使大肠杆菌等细菌裂解。将4种启动子分别插入质粒的P区，以构建表达载体，导入大肠杆菌可获得对化合物X敏感的工程菌。
①经PCR反应体系扩增启动子片段时，DNA聚合酶只能从核苷酸链的 3'端3'端（选填“5'端”或“3'端”）开始延伸DNA链。除引物外，PCR反应体系中还包含缓冲液、模板DNA、dNTPdNTP和 耐高温DNA聚合酶耐高温DNA聚合酶等成分。
②为使4种启动子正确插入到质粒上，利用PCR技术扩增启动子时，需分别在4种启动子A端和B端添加限制酶 XhoIXhoI和 SapISapI的酶切位点。
③为初步检测表达载体是否构建成功，可用上述两种限制酶对质粒和4种表达载体进行切割，然后对酶切产物进行凝胶电泳，检测结果如图3所示。由此可初步判定表达载体的构建 成功成功。（填“成功”或“不成功”）
④作为受体细胞的大肠杆菌能在 含化合物X含化合物X的培养液中生长。
（3）将获得的工程菌甲、乙、丙、丁和对照菌分别培养在细菌培养液中，2小时后在培养液中加入化合物X继续培养，检测细菌的密度，结果如图4所示。
①实验中的对照菌是 导入空质粒的大肠杆菌导入空质粒的大肠杆菌。
②实验中对细菌密度的统计方法应为 稀释涂布平板法稀释涂布平板法。
③据图4可知，4种工程菌均启动了对化合物X的响应，判断的依据是 在加入化合物X前，4种工程菌的生长情况与对照菌无明显差异，加入化合物X后，4种工程菌的菌体密度显著低于对照菌在加入化合物X前，4种工程菌的生长情况与对照菌无明显差异，加入化合物X后，4种工程菌的菌体密度显著低于对照菌。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】不属于；在牛肉膏蛋白胨培养基中很多细菌能正常生长繁殖，不能抑制或阻止除大肠杆菌之外的其他微生物的生长；3'端；dNTP；耐高温DNA聚合酶；XhoI；SapI；成功；含化合物X；导入空质粒的大肠杆菌；稀释涂布平板法；在加入化合物X前，4种工程菌的生长情况与对照菌无明显差异，加入化合物X后，4种工程菌的菌体密度显著低于对照菌
【解答】
【点评】
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发布：2024/7/7 8:0:9组卷：3引用：2难度：0.6
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