绿色荧光蛋白（GFP）是水母体内的一种发光蛋白，其编码基因可作为基因工程中载体上的标记基因。研究人员在pBIN19质粒的LacZ基因（β-半乳糖苷酶基因）内部插入GFP基因和CaMV35S（强启动子）构建成可用于培育转基因植物的质粒载体pBIN-35S-GFP（如图所示）。回答下列问题：
注：质粒上“LB→……←RB”片段为T-DNA片段，Kmr基因为卡那霉素抗性基因，质粒上限制酶的识别序列省略未标出。
（4）构建pBIN-35S-GFP载体的过程中需要用到 限制酶和DNA连接限制酶和DNA连接酶，要插入CaMV35S的目的是 启动GFP基因的表达启动GFP基因的表达，因此CaMV35S需插入到GFP基因的 上游上游。
（5）已知β-半乳糖苷酶能将无色的X-gal分解为半乳糖和蓝色的5-溴-4-氯靛蓝。把GFP基因和CaMV35S插入到LacZ基因的内部，除了通过菌落是否产生绿色荧光来筛选导入质粒pBIN-35S-GFP外，还可以通过添加了 卡那霉素和X-gal卡那霉素和X-gal培养基，菌落颜色呈 白白色的就是导入了质粒pBIN-35S-GFP的受体菌的克隆。
（6）若用pBIN-35S-GFP载体采用农杆菌转化法进行植物转基因操作，外植体转化完成后常用抗生素进行除菌。若利用PCR技术判定农杆菌是否已经除尽，可根据 oriV或oriT或KmroriV或oriT或Kmr（填图中质粒片段名称）基因的序列设计引物，对PCR的产物进行凝胶电泳，若 无PCR产物条带无PCR产物条带，说明外植体中已无农杆菌残留。
（7）绿色荧光蛋白基因可作为基因工程中载体上的标记基因。绿色荧光蛋白则可用于研究蛋白质在细胞中的定位，原因除了绿色荧光蛋白能够发荧光外，还有一重要原因是GFP结合到被研究的目的蛋白的末端，不影响该蛋白的 生物学活性生物学活性，还是按照无GFP结合的蛋白同样的路径运转。要使GFP结合到目的蛋白的末端，构建重组质粒时目的基因、GFP基因、CaMV35S的连接顺序为 CaMV35S→目的基因→GFP基因CaMV35S→目的基因→GFP基因（用“→”回答）。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】限制酶和DNA连接；启动GFP基因的表达；上游；卡那霉素和X-gal；白；oriV或oriT或Kmr；无PCR产物条带；生物学活性；CaMV35S→目的基因→GFP基因
【解答】
【点评】
声明：本试题解析著作权属菁优网所有，未经书面同意，不得复制发布。
发布：2024/4/20 14:35:0组卷：11引用：2难度：0.6
相似题
-
1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
3．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
