某研究团队从沙漠野生柽柳中克隆出了一个耐盐碱基因TcSR1。该团队用限制酶BalⅡ切割目的基因TcSR1，用限制酶BamHⅠ切割质粒载体V3，两种限制酶的识别序列及酶切位点如图所示，经过体外重组和转化，最终获得了能够在盐碱地生长的杨树新品种。回答下列问题：
（1）使用 PCRPCR技术在体外扩增耐盐碱基因TcSR1，扩增时需要 22种引物。基因TcSR1不直接导入杨树细胞，原因是 目的基因无复制原点；无标记基因，无法鉴定受体细胞是否导入目的基因；目的基因无法在受体细胞中稳定存在目的基因无复制原点；无标记基因，无法鉴定受体细胞是否导入目的基因；目的基因无法在受体细胞中稳定存在（答出两点即可）。
（2）用限制酶BalⅡ切割目的基因和用限制酶BamHⅠ切割质粒载体V3后，再用 DNA连接DNA连接酶处理，以构建基因表达载体，该表达载体不能够被BalⅡ或BamHⅠ识别并切割，原因是 连接后的序列无BalⅡ或BamHⅠ可识别的特定碱基序列（或DNA分子序列发生了改变，重组分子不能被BalⅡ或BamHⅠ识别和切割）连接后的序列无BalⅡ或BamHⅠ可识别的特定碱基序列（或DNA分子序列发生了改变，重组分子不能被BalⅡ或BamHⅠ识别和切割）。
（3）将目的基因导入杨树细胞，培育后筛选转化阳性的植株。若要检测杨树植株中目的基因TcSR1是否发生转录，可采用 分子杂交分子杂交技术，需要将 放射性同位素标记的基因TcSR1放射性同位素标记的基因TcSR1片段制成探针，通过检测放射性达到目的。
（4）为进一步研究转基因杨树的耐盐碱机制，还需要进一步开展研究，实验思路是通过 植物组织培养植物组织培养技术获得大量转基因植物，然后 在高盐碱胁迫下观察杨树植株的生长状况在高盐碱胁迫下观察杨树植株的生长状况。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】PCR；2；目的基因无复制原点；无标记基因，无法鉴定受体细胞是否导入目的基因；目的基因无法在受体细胞中稳定存在；DNA连接；连接后的序列无BalⅡ或BamHⅠ可识别的特定碱基序列（或DNA分子序列发生了改变，重组分子不能被BalⅡ或BamHⅠ识别和切割）；分子杂交；放射性同位素标记的基因TcSR1；植物组织培养；在高盐碱胁迫下观察杨树植株的生长状况
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：13引用：1难度：0.7
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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