蜂毒前溶血肽原是prepromelittin基因（以下简称PL基因）的表达产物，在蜜蜂体内合成后首先加工成蜂毒溶血肽原（蜂毒肽前体蛋白），被进一步水解形成分泌蛋白蜂毒肽。与蜂毒肽相比，蜂毒前溶血肽原具有较大的溶解度，且对细胞的破坏能力小，可利用基因工程方法合成蜂毒肽的前体产物。
（1）生产蜂毒肽常选用微生物做受体细胞，优点是

微生物生理结构和遗传物质简单，生产成本低，生长繁殖快、容易进行遗传物质操作

微生物生理结构和遗传物质简单，生产成本低，生长繁殖快、容易进行遗传物质操作

（答出两点即可）；原核细胞

不能

不能

（填“能“或“不能“）将蜂毒溶血肽原加工成蜂毒肽，原因是

原核细胞无内质网和高尔基体，无法对表达出的蜂毒前溶血肽原进行加工

原核细胞无内质网和高尔基体，无法对表达出的蜂毒前溶血肽原进行加工

。
（2）为了解决（1）中的问题，对蜂毒前溶血肽原基因进行改造（如图1），以便后期用羟胺（一种能专一性裂解特定两个氨基酸之间肽键的化合物）对生产出的蜂毒前溶血肽原进行加工。根据图1推测羟胺的识别位点是

Asn-Gly（NG丙氨酸-甘氨酸）

Asn-Gly（NG丙氨酸-甘氨酸）

。为实现最终生产有活性的蜂毒肽，与原DNA序列相比，改造后的序列末端还删除了Gly的对应编码链序列，推测删除的理由是

有活性的蜂毒肽末端没有甘氨酸

有活性的蜂毒肽末端没有甘氨酸

。改造后的DNA编码区序列长度为

213

213

bp。

注：①阴影：蜂毒肽序列；方框：Asn-Gly位点；
②图1中所示的“原DNA序列”为蜂毒前溶血肽原的编码区序列的编码链；
③甲硫氨酸，缩写为M，由起始密码子AUG编码；丙氨酸（Asn），缩写为N；
④甘氨酸（Gly），缩写为G，由密码子GGU、GGC、GGA、GGG编码。
⑤终止密码子UAA、UGA和UAG
（3）根据改造后的基因序列，利用人工化学合成方法进行全基因合成，设计并合成引物对合成基因进行PCR扩增，引物序列的长度越长、GC含量越高，PCR过程中退火温度的设定值越

高

高

。将PCR产物和pGEX-4T-1载体利用酶

EcoRI、SalI和DNA连接酶（限制酶+DNA连接酶）

EcoRI、SalI和DNA连接酶（限制酶+DNA连接酶）

进行基因表达载体的构建，获得蜂毒前溶血肽原与GST（一种标签蛋白）融合表达重组质粒pGEX-4T-1/PPMe（见图2）。扩增PL基因时设计了引物对M1和M2，其中M1的部分序列是：5'-GAATTC-3'且EcoRⅠ的识别序列是GAATTC，请续写出该引物的后8个碱基5'

ATGAAATT

ATGAAATT

3'。
（4）将重组表达载体转化至

不含有

不含有

（“含有“或“不含有”）pGEX-4T-1/PPMel的大肠杆菌的感受态细胞，借助PCR和电泳鉴定是否转化成功：凝胶中DNA分子的迁移速率与

大小（长度），构象（形状），电荷，凝胶浓度，电压

大小（长度），构象（形状），电荷，凝胶浓度，电压

有关（答2点）。
（5）若培育相应的转基因植物；常用农杆菌转化法，需将目的基因插入质粒的

T-DNA

T-DNA

中，最后通过植物组织培养技术培育转基因植株。