某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）。有人将此质粒载体用BamHⅠ酶切后，与用BamHⅠ酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：

（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有

能自我复制

能自我复制

、

具有标记基因（有一个或多个限制酶切割位点）

具有标记基因（有一个或多个限制酶切割位点）

（答出两点即可）。而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。
（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是①

二者均不含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长

二者均不含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长

；并且②

含有质粒载体

含有质粒载体

和③

含有插入了目的基因的重组质粒

含有插入了目的基因的重组质粒

的细胞也是不能区分的，其原因是④

二者均含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长

二者均含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长

。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用⑤

含有四环素

含有四环素

的固体培养基。