限制酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的识别序列及其切割位点如表所示。某质粒、目的基因两端相关限制酶的酶切位点分别如图1、图2所示。回答下列问题：
| 限制酶 | Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | Ⅳ |
| 识别序列及切割位点 |
|
|
|
|
（1）只与一个五碳糖连接的磷酸基团称为游离的磷酸基团，一个质粒分子含有
0
0
个游离的磷酸基团。图示质粒经限制酶Ⅰ完全酶切后产生的DNA片段共含有 4
4
个游离的磷酸基团。（2）限制酶Ⅱ能断开的是图3中
a
a
（填字母）处的键。若经限制酶Ⅰ切割的DNA末端与经限制酶Ⅱ切割的DNA末端连接，则连接部位的6个碱基对序列为 
都不能
都不能
（填“都能”、“都不能”或“中只有一种能”）将其切开。（3）若用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，则应选用限制酶
Ⅱ、Ⅳ
Ⅱ、Ⅳ
共同切割，不选用另外两种限制酶的原因分别是 质粒上不含限制酶Ⅲ的识别序列及其切割位点，选用限制酶1可能会使质粒中的启动子丢失（或四环素基因是标记基因之一，若用限制酶I处理质粒，则会使该标记基因失去标记作用）
质粒上不含限制酶Ⅲ的识别序列及其切割位点，选用限制酶1可能会使质粒中的启动子丢失（或四环素基因是标记基因之一，若用限制酶I处理质粒，则会使该标记基因失去标记作用）
。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】0；4；a；；都不能；Ⅱ、Ⅳ；质粒上不含限制酶Ⅲ的识别序列及其切割位点，选用限制酶1可能会使质粒中的启动子丢失（或四环素基因是标记基因之一，若用限制酶I处理质粒，则会使该标记基因失去标记作用）
；都不能；Ⅱ、Ⅳ；质粒上不含限制酶Ⅲ的识别序列及其切割位点，选用限制酶1可能会使质粒中的启动子丢失（或四环素基因是标记基因之一，若用限制酶I处理质粒，则会使该标记基因失去标记作用）【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：3引用：2难度：0.7
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