人们发现有机磷化合物能有效抑制生物体内的乙酰胆碱酯酶，从而表现出很好的杀虫、灭鼠效果，但是有机磷化合物会严重破坏生态环境。甲基对硫磷水解酶（mph）能特异性地与有机磷化合物结合，研究人员利用转基因技术实现了大肠杆菌高效表达甲基对硫磷水解酶（mph），如图1所示。请根据基因工程过程回答以下问题：
（1）构建一株具有全细胞催化活性的大肠杆菌工程菌的关键步骤是要构建pET23a-gfp-mph-r的 基因表达载体基因表达载体。构建pET23a-gfp-mph-r过程中应用 Ca2+Ca2+处理使之成为感受态细胞。研究人员不直接将目的基因mph-r导入大肠杆菌的原因是 使目的基因mph-r能在受体细胞中稳定存在和表达使目的基因mph-r能在受体细胞中稳定存在和表达。
（2）图中T7启动子的功能为 RNA聚合酶识别和结合位点并驱动基因转录出mRNARNA聚合酶识别和结合位点并驱动基因转录出mRNA。gfp作为一种融合标签，能很好地提高蛋白的表达量，因此还添加了TEV蛋白酶切位点（TEVsite），其目的是 通过TEV蛋白酶去掉gfp中融合标签得到大量纯的mph-r蛋白通过TEV蛋白酶去掉gfp中融合标签得到大量纯的mph-r蛋白。
（3）为了筛选出具有目的基因的大肠杆菌，应将常规转化后的菌液涂布到含 氨苄青霉素（Ampr）氨苄青霉素（Ampr）的LB固体培养基上。
（4）测序成功的表达质粒转化大肠杆菌用SDS-PAGE电泳检测全细胞蛋白表达情况，如图2所示，第4泳道为mph-r单独表达的表达情况，第5泳道为gfp单独表达的表达情况，请问：1至3泳道哪一个为融合gfp标签的mph-r蛋白？为什么？第1泳道，根据第4泳道mph-r蛋白大小约35kD，而第5泳道gfp中蛋白大小约30kD，融合gfp标签的mph-r蛋白约为65kD，第3泳道不符合。根据题意，融合gfp标签后的mph-r的表达量得到显著提高，所以蛋白表达量更大，应为第1泳道第1泳道，根据第4泳道mph-r蛋白大小约35kD，而第5泳道gfp中蛋白大小约30kD，融合gfp标签的mph-r蛋白约为65kD，第3泳道不符合。根据题意，融合gfp标签后的mph-r的表达量得到显著提高，所以蛋白表达量更大，应为第1泳道。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】基因表达载体；Ca2+；使目的基因mph-r能在受体细胞中稳定存在和表达；RNA聚合酶识别和结合位点并驱动基因转录出mRNA；通过TEV蛋白酶去掉gfp中融合标签得到大量纯的mph-r蛋白；氨苄青霉素（Ampr）；第1泳道，根据第4泳道mph-r蛋白大小约35kD，而第5泳道gfp中蛋白大小约30kD，融合gfp标签的mph-r蛋白约为65kD，第3泳道不符合。根据题意，融合gfp标签后的mph-r的表达量得到显著提高，所以蛋白表达量更大，应为第1泳道
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：11引用：3难度：0.5
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
