大肠杆菌是发酵工程常用的微生物。杂菌污染是导致大肠杆菌发酵失败的重要原因。为解决该问题，科学家利用基因工程技术，改造出一种加强型大肠杆菌。

（1）发酵过程中杂菌会与大肠杆菌

竞争

竞争

培养液中的营养物质，导致大肠杆菌发酵效率降低。
（2）①甲酰胺和亚磷酸盐是特殊的氮源和磷源，其被微生物分解利用的过程如下图所示。大肠杆菌和杂菌都不能同时利用这两种物质，原因是

大肠杆菌和杂菌都不含有F酶和P酶

大肠杆菌和杂菌都不含有F酶和P酶

，无法合成NH₄⁺和磷酸盐。
②已知α菌能合成F酶，但不能合成P酶。为获得能合成P酶的微生物，研究人员进行如图1筛选，正确的是

AD

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。
A．图中所用培养液（基）应以亚磷酸盐为唯一磷源
B．图中B处接种方法是平板划线法
C．从菜园、植物园等地获取的样品需要进行灭菌
D．图1中C中长出的细菌能够合成P酶
③细菌的核糖体RNA（rRNA）序列可作为菌种鉴定的依据。经过鉴定、筛选出细菌β。
（3）科研人员分别从α和β菌中获得F酶和P酶基因，使二者在大肠杆菌中同时表达，表达方式有两种。
①融合表达：将F、P基因间用片段linker连接成1个融合基因，与质粒A重组。该基因能表达出一个融合蛋白，同时具有F酶和P酶的特性。
②共表达：将F、P基因与质粒B重组，两者可各自表达，互不干扰。科学家将重组质粒A和B分别转入大肠杆菌获得菌A和菌B，在甲酰胺、亚磷酸盐为唯一氮源、磷源的培养基中培养，检测其中细菌浓度的变化，获取最优加强型大肠杆菌，结果如图2。可知质粒

A

A

（A/B）的表达效果更好。请在下图质粒上标出可能的基因序列

。
（4）图1所用的接种方法可用来对活菌进行计数，统计的数目往往比活菌的实际数目偏低，这是因为

当两个或多个细胞连在一起时，观察计数只能计为一个菌落

当两个或多个细胞连在一起时，观察计数只能计为一个菌落

。此外，测定微生物数目的另一种方法是

显微镜直接计数法

显微镜直接计数法

。