为研究血清及EVO（吴茱萸碱）对细胞增殖的影响及作用机制，科研人员做了以下实验。请回答下列问题：
Ⅰ、研究不同“层次”血清对细胞增殖的影响。
科研人员将分离出的牛血清装入专用血清瓶后放入冰箱中直立静置一段时间。取三根刻度吸管，将血清从上到下轻轻吸成均等的三份，分别装入消毒后的瓶中，标记为上、中、下，再分别从三个瓶中吸取等量的血清置于另一小瓶中，混合均匀备用。分别取等量的不同“层次”的血清和混合血清加入到新配制的动物细胞培养液中，再接种小鼠上皮细胞（接种细胞密度为5×104个/mL），在适宜条件下培养72h后，进行计数，结果如表。
| 组别 | 上 | 中 | 下 | 混 |
| 72h细胞数/个mL-1 | 9.75×104 | 1.04×105 | 7.5×104 | 1.85×105 |
维持培养液的pH
维持培养液的pH
。（2）培养液中加入动物血清的作用是
提供细胞生存和增殖所必需的生长调节因子
提供细胞生存和增殖所必需的生长调节因子
，还加入一定量抗生素的目的是 防止细菌生长
防止细菌生长
。吸取血清过程中，要严格禁止震动和摇晃，目的是 防止不同层次血清混合
防止不同层次血清混合
。（3）如果用血细胞计数板计数细胞时进行如图1所示的操作，统计出来的数据比实际值偏
大
大
。
（4）从表中结果可以看出，不同“层次”的血清对细胞增殖的影响不同。造成这种结果的主要原因是
不同“层次“血清中营养成分不同
不同“层次“血清中营养成分不同
。（5）根据实验结果，在动物细胞培养过程中，正确使用血清的方法是
将血清充分混匀后再加入到培养液中
将血清充分混匀后再加入到培养液中
。Ⅱ、检测EVO对人胃癌细胞BGC-823增殖的影响。
（1）①用含动物血清的DME/F-12培养基置于恒温培养箱中培养BGC-823。
②取出上述培养的细胞，加入胰蛋白酶制成单细胞悬液，置于加入不同浓度EVO的多孔板中进行培养。
③EVO对BGC-823细胞增殖影响的实验结果如图2。
实验结果表明
在一定范围内，随着EVO浓度的升高，对BGC-823细胞增殖的抑制作用加强
在一定范围内，随着EVO浓度的升高，对BGC-823细胞增殖的抑制作用加强
。（2）检测EVO对BGC-823细胞周期和细胞凋亡相关蛋白表达的影响，结果如图3。根据上述实验，可判断是
p53
p53
细胞周期抑制蛋白，该蛋白能与细胞周期蛋白基因的启动子结合，抑制其转录，从而抑制BGC-823细胞周期的运行。细胞凋亡蛋白Caspase-3表达量。（3）综上所述，推测EVO对人胃癌细胞的作用机制是
EVO促进细胞周期抑制蛋白的合成，该蛋白能与细胞周期蛋白基因的启动子结合，抑制其转录，从而抑制BGC-823细胞周期的运行
EVO促进细胞周期抑制蛋白的合成，该蛋白能与细胞周期蛋白基因的启动子结合，抑制其转录，从而抑制BGC-823细胞周期的运行
。【考点】动物细胞培养的条件与过程．
【答案】维持培养液的pH；提供细胞生存和增殖所必需的生长调节因子；防止细菌生长；防止不同层次血清混合；大；不同“层次“血清中营养成分不同；将血清充分混匀后再加入到培养液中；在一定范围内，随着EVO浓度的升高，对BGC-823细胞增殖的抑制作用加强；p53；EVO促进细胞周期抑制蛋白的合成，该蛋白能与细胞周期蛋白基因的启动子结合，抑制其转录，从而抑制BGC-823细胞周期的运行
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：10引用：2难度：0.6
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1．动物细胞培养和植物组织培养是细胞工程的基本技术，下列关于这两项技术的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 1:30:1组卷：29引用：2难度：0.7 -
2．回答与基因工程、动物克隆和胚胎工程有关的问题：
（1）几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。在进行基因工程操作时，可以从植物体中提取几丁质酶的mRNA，以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是。若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。
（2）为了提高动物成纤维细胞克隆形成率，可以选择适宜的培养基、添加牛血清、以支持生长等措施。当第一个卡氏瓶中的细胞浓度不再增加时，若要细胞继续增殖，可采用的方法是。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是。
（3）下列关于胚胎工程的叙述，错误的是
A．在动物的饲料中添加一定量的促性腺激素促使超数排卵
B．若在囊胚期进行胚胎分割，内细胞团均等分割，滋养成则不必
C．可以从雌性动物体内卵泡处吸取卵泡液，取出卵母细胞进一步培养成熟
D．胚胎成纤维细胞可以用于胚胎干细胞的培养，因为其能分泌抑制细胞分化的物质。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：4引用：1难度：0.7 -
3．据国际糖尿病联盟最新数据，2021年全球约5.37亿成人患有糖尿病，670万成人因糖尿病或其并发症死亡。如图是研究人员提出的治疗方案，请回答下列问题：
（1）从患者体内获得体细胞后，对其进行的初次培养称为，培养的细胞在贴壁生长至铺满培养皿底时停止分裂，这种现象称为。一般来说，动物细胞培养需要的条件有（少答出两点）。
（2）利用PCR技术扩增正常胰岛素基因的前提条件是。目前临床用的胰岛素生效较慢，科学家将胰岛素β链的第28和29个氨基酸调换顺序，成功获得了速效胰岛素。生产速效胰岛素，需要对进行定向改造。
A.胰岛素
B.胰岛素mRNA
C.胰岛素基因
D.胰岛
（3）欲检测胰岛类似细胞是否具有胰岛B细胞的正常生理功能，可设计如下实验：将等量的胰岛类似细胞与正常胰岛B细胞分别加入两组相等浓度的培养液中，适宜且相同条件下进行培养，一段时间后分别检测两组培养液中。
（4）该治疗糖尿病的方法与异体移植相比，突出的优点是。发布：2024/12/31 2:30:2组卷：35引用：2难度：0.6
