回答与转基因植物的培育和植物克隆有关的问题：
木瓜环斑病毒（PRV）是一种对木瓜危害极大的病毒，科学家通过基因工程技术将抗环斑病毒基因（PRSV）导入木瓜中表达出抗环斑病蛋白，从而获得抗环斑病的木瓜。
（1）构建重组DNA分子时，使用两种限制性核酸内切酶处理，优点是可防止目的基因和切割后的载体DNA自身环化及反向拼接反向拼接。为使PRSV高效表达，需要对重组载体上目的基因相关的启动部位（或启动子）启动部位（或启动子）序列进行修饰。
（2）获取活性强的农杆菌菌液，通过冰浴、离心、去上清液等相应处理，加入适量预冷的含15%甘油的CaCl2CaCl2溶液，制成感受态农杆菌细胞。转化后的农杆菌要正常培养一段时间，才能置于含特定抗生素的培养基上筛选，正常培养一段时间的目的是让农杆菌恢复正常的生理状态，表达抗生素抗性基因让农杆菌恢复正常的生理状态，表达抗生素抗性基因。优先选用木瓜受伤的受伤的（受伤的/完好的）叶片与含重组质粒的农杆菌共培养完成转化，促使其不断分裂形成愈伤组织。
（3）试管苗需锻炼后才可移栽至大田，移栽时需先洗去沾在根上的琼脂培养基沾在根上的琼脂培养基以免栽后发霉。
（4）为了快速获得稳定遗传的抗环斑病木瓜，可选择花药离体花药离体培养获得的细胞系作为受体细胞。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】反向拼接；启动部位（或启动子）；CaCl2；让农杆菌恢复正常的生理状态，表达抗生素抗性基因；受伤的；沾在根上的琼脂培养基；花药离体
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：22引用：1难度：0.5
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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