苏云金杆菌产生的Bt抗虫蛋白具有良好的杀虫效果，Bt基因也因此成为应用最为广泛的杀虫基因。Bt基因位于苏云金杆菌的质粒A上，为了解Bt基因的序列信息首先要得到完整的Bt基因，科学家们进行了如下实验。回答下列问题：
（1）首先用限制酶HindⅢ处理质粒A，得到多个DNA片段，分别与质粒B连接，获得重组DNA分子，并将这些重组DNA分子导入经 Ca2+Ca2+处理的大肠杆菌中，由此构建了苏云金杆菌的部分基因文库。
（2）研究人员利用抗Bt抗虫蛋白的抗体，进行 抗原—抗体杂交抗原—抗体杂交，并通过电泳检测上述文库中不同大肠杆菌菌株的Bt抗虫蛋白基因的表达情况，结果如图1所示。
根据电泳结果推测菌株3中仅插入了Bt基因的一部分序列，并非完整基因，研究人员作出这一推测的依据是 菌株3中Bt基因表达的蛋白质的分子量小于Bt抗虫蛋白的分子量菌株3中Bt基因表达的蛋白质的分子量小于Bt抗虫蛋白的分子量。对菌株3中插入的DNA片段序列进行测序（记为Bt-1序列），并根据序列制成了DNA探针X。
（3）为了获得完整的Bt基因，研究人员又使用限制酶PstⅠ切割质粒A，得到多个DNA片段。利用探针X通过DNA分子杂交方法可筛选出其中含有Bt基因序列的DNA片段，对其进行测序（记为Bt-2序列）。如图2所示，为了将Bt-1和Bt-2两段DNA分子连接起来，研究人员单独使用 HindⅢ或PstⅠHindⅢ或PstⅠ和DNA连接酶处理两段序列，获得的重组DNA分子记为Bt-3。
（4）为了进一步验证Bt-3中包含完整的Bt基因，请写出简要的实验步骤和检测指标 将Bt-3与质粒B连接构建重组DNA后，导入大肠杆菌，用抗Bt抗虫蛋白的抗体进行抗原—抗体杂交，并通过电泳检测该大肠杆菌菌株的Bt抗虫蛋白基因的表达情况将Bt-3与质粒B连接构建重组DNA后，导入大肠杆菌，用抗Bt抗虫蛋白的抗体进行抗原—抗体杂交，并通过电泳检测该大肠杆菌菌株的Bt抗虫蛋白基因的表达情况。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】Ca2+；抗原—抗体杂交；菌株3中Bt基因表达的蛋白质的分子量小于Bt抗虫蛋白的分子量；HindⅢ或PstⅠ；将Bt-3与质粒B连接构建重组DNA后，导入大肠杆菌，用抗Bt抗虫蛋白的抗体进行抗原—抗体杂交，并通过电泳检测该大肠杆菌菌株的Bt抗虫蛋白基因的表达情况
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：2引用：2难度：0.6
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
3．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
