玉米是重要的粮食作物，其叶片细胞中的P蛋白是一种水通道蛋白，由P基因编码，在植物生长发育过程中对水分的吸收具有重要的调节功能，为了探究P蛋白的超量表达对玉米生长的影响，科研人员进行了超量表达P蛋白转基因玉米的生理特性等研究。
（1）超量表达P蛋白转基因玉米的获得：
①利用PCR技术以图1中的DNA片段为模板扩增P基因，需要的引物有 BCBC（从A、B、C、D四种单链DNA片段中选择）。上述过程中，至少经过 33次循环后会产生双链等长的P基因片段，循环4次共需要的引
物数为 3030。
②在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点（注：图中所示限制酶切割后形成的黏性末端各不相同）如图2所示。强启动子是一段有特殊结构的DNA片段，能被 RNA聚合酶RNA聚合酶识别并结合，驱动基因的持续转录。为使P基因在玉米植株中超量表达，应优先选用 BamHⅠ和SacⅠBamHⅠ和SacⅠ酶组合将DNA片段和Ti质粒切开后构建重组表达载体。T-DNA在该实验中的作用是 将强启动子和P基因带入玉米细胞并整合到玉米细胞染色体DNA上将强启动子和P基因带入玉米细胞并整合到玉米细胞染色体DNA上。
③将农杆菌浸泡过的玉米愈伤组织进行植物组织培养，培养基中需加入 潮霉素潮霉素进行筛选，筛选出的愈伤组织再分化再分化形成丛芽，最终获得多个转基因玉米株系。
④P蛋白在玉米株系的表达量如图3所示。据图3分析，选择al、a2、a3玉米株系，作为超量表达P蛋白转基因玉米的生理特性研究的实验材料，理由是 al、a2、a3玉米株系的P蛋白表达量显著高于野生型玉米al、a2、a3玉米株系的P蛋白表达量显著高于野生型玉米。
（2）超量表达P蛋白转基因玉米的生理特性研究：选取长势相同且生长状况良好的野生型玉米和a株系玉米，干旱处理15天，测量植株水分散失率，并在不同CO2浓度下测量地上部分鲜重，获得相对生物量。结果如图4所示。
可见干旱条件下，与野生型玉米相比，a株系玉米超量表达P蛋白，使植株对 水分和CO2水分和CO2的利用率更高，光合效率更高。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】BC；3；30；RNA聚合酶；BamHⅠ和SacⅠ；将强启动子和P基因带入玉米细胞并整合到玉米细胞染色体DNA上；潮霉素；再分化；al、a2、a3玉米株系的P蛋白表达量显著高于野生型玉米；水分和CO2
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：11引用：1难度：0.7
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
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