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肠道微生物对宿主健康具有重要影响,但目前缺乏对特定菌株进行基因编辑的有效手段。科研人员尝试使用M13噬菌体作为载体,对大肠杆菌进行基因编辑。
(1)M13噬菌体与T2噬菌体相似,能够侵染大肠杆菌,其蛋白质外壳留在菌体外,头部的
DNA
DNA
注入菌体内,指导子代噬菌体的复制增殖。与T2噬菌体不同,被M13噬菌体侵染的大肠杆菌不发生裂解。
(2)科研人员将绿色荧光蛋白基因特异性序列(sgfp )、Cas酶基因与利用特定方法得到的M13噬菌体的环状DNA进行重组,构建重组基因编辑质粒(pCG),如图1。

①构建pCG需要用到的工具酶有
限制酶和DNA连接酶
限制酶和DNA连接酶

②以pCG的绿色荧光蛋白基因特异性序列(sgfp )经
转录
转录
过程形成的RNA,会靶向结合绿色荧光蛋白基因,从而使Cas酶能够切割绿色荧光蛋白基因。
(3)科研人员将绿色荧光蛋白基因和红色荧光蛋白基因导入大肠杆菌,获得GS菌株。先用添加GS菌株的饲料喂养小鼠,一段时间后,将小鼠分为实验组和对照组。其中,实验组小鼠用添加含
pCG
pCG
的M13噬菌体和
羧苄青霉素
羧苄青霉素
的饲料喂养,以筛选获得肠道微生物被基因编辑的小鼠。本实验对照组使用的质粒应当包括图1中的
ACD
ACD

A.Cmr
B.sgfp
C.Ori
D.Cas
(4)为确认M13噬菌体作为载体对大肠杆菌进行基因编辑的可行性和特异性,科研人员检测肠道微生物的变化,结果如图2。
①图2中,标号为a、c的区域分别代表含有红色荧光的微生物和无荧光的微生物,b区域代表含有
红、绿叠加色
红、绿叠加色
荧光的微生物。
②图3-1为实验组第0天小鼠肠道微生物的荧光情况,请在图3-2中标注该组小鼠第14天时肠道微生物的荧光区域编号。
③图2表明,实验组中M13噬菌体能
成功地特异性敲除绿色荧光蛋白
成功地特异性敲除绿色荧光蛋白

【答案】DNA;限制酶和DNA连接酶;转录;pCG;羧苄青霉素;ACD;红、绿叠加色;成功地特异性敲除绿色荧光蛋白
【解答】
【点评】
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发布:2024/4/20 14:35:0组卷:83引用:5难度:0.6
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    。在体外利用PCR技术扩增目的基因时,使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是
     
    。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的
     

    (3)DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶,常见的有
     
     
    ,其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是
     
    。当几丁质酶基因和质粒载体连接时,DNA连接酶催化形成的化学键是
     

    (4)提取RNA时,提取液中需添加RNA酶抑制剂,其目的是
     

    (5)若获得的转基因植株(几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中)抗真菌病的能力没有提高,根据中心法则分析,其可能的原因是
     

    发布:2025/1/5 8:0:1组卷:2引用:2难度:0.6
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