人和大鼠的抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)蛋白是血浆中的一种重要抗凝血因子,主要由肝脏合成。临床上,人的ATⅢ有预防和治疗急慢性血栓形成的作用。目前,ATⅢ有3种来源,从血浆中纯化、用基因工程细胞生产和用乳腺生物反应器生产。
(1)在构建ATⅢ基因工程细胞时,可先从肝脏细胞中分离mRNA,通过反转录反转录获得目的基因cDNA;然后用DNA连接DNA连接酶将目的基因与运载体构建成基因表达载体;常用胎儿成纤维细胞作为ATⅢ基因表达载体的受体细胞,原因是该细胞的全能性较高该细胞的全能性较高。
(2)大规模培养ATⅢ基因工程细胞时,由于动物细胞培养过程中会出现贴壁生长贴壁生长现象,常在培养容器中加入中空玻璃管,以扩大细胞贴壁生长的附着面积。
(3)还可将ATⅢ基因工程细胞作为供体细胞,采用核移植核移植技术获得克隆动物,为保证ATⅢ基因在乳腺细胞中表达,需将目的基因与乳腺蛋白基因的启动子启动子等调控组件重组在一起。
【考点】基因工程的操作过程综合.
【答案】反转录;DNA连接;该细胞的全能性较高;贴壁生长;核移植;启动子
【解答】
【点评】
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