基因检测是指通过检测生物体中的DNA序列，以了解生物体基因状况的技术手段。Sanger双脱氧链终止法是DNA测序的基本方法，其原理是：核酸模板在核酸聚合酶、带有3′-OH末端的单链核苷酸引物、四种dNTP存在的条件下复制或转录时，如果在反应系统中分别引入单一种类的ddNTP（即2、3双脱氧核苷三磷酸，在脱氧核糖的3′位置缺少一个羟基，故不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键），只要ddNTP掺入链端，该链就停止延长，链端掺入dNTP的片段可继续延长。通过电泳将不同长度的片段分开，DNA片段越小，距离起点越远，根据末端核苷酸可得到原始序列信息。具体流程图如图1。
（1）若待测核酸模板为双链DNA，首先要作 变性变性处理，与引物结合后，在DNA聚合酶作用下子链沿 从5′端向3′端从5′端向3′端方向（填“5′端向3′端”或“3′端向5′端”）进行延伸反应。若待测核酸模板为RNA，则需要在 逆转录逆转录酶的帮助下合成DNA单链片段。
（2）ddNTP为2，3-双脱氧核苷三磷酸，只要ddNTP掺入链端，该链就停止延长的原因是 3号碳上不是羟基，不能与下一个脱氧核苷酸的磷酸形成磷酸二酯键3号碳上不是羟基，不能与下一个脱氧核苷酸的磷酸形成磷酸二酯键。
（3）假设某反应体系中，待测DNA单链序列3′GTACCGTA5′，加入4种dNTP和ddATP，经过双脱氧链终止法处理，会得到 33种片段，其中最短的片段序列是 CddACddA。
（4）假设某次Sanger双脱氧链终止法测序得到的电泳图如图2所示，则待测DNA序列从5′端到3′端为 ACTACTGGTAACTACTGGTA。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定；目的基因的筛选与获取．
【答案】变性；从5′端向3′端；逆转录；3号碳上不是羟基，不能与下一个脱氧核苷酸的磷酸形成磷酸二酯键；3；CddA；ACTACTGGTA
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：55引用：1难度：0.7
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1．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
2．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：3引用：3难度：0.7
