人呼吸道合胞病毒（HRSV）是一种单链RNA病毒，图1是构建人呼吸道合胞病毒基因组载体的示意图，如表是相关限制酶的识别序列及切割位点，请回答：

限制酶	BclⅠ	EcoRⅠ	XbaⅠ	Sau3AⅠ	BamHⅠ
识别序列及切割位点	T↓GATCA	G↓AATTC	T↓CTAGA	↓GATC	G↓GATCC

（1）HRSV的基因组为-RNA，入侵细胞后在

RNA聚合酶

RNA聚合酶

的催化下合成+RNA。
（2）过程②设计引物时在两种引物的5′端分别添加

Xba I和BamH I

Xba I和BamH I

酶的识别序列。过程③需要用

Xba I和 Bcl I

Xba I和 Bcl I

酶切割质粒A。
（3）过程④将质粒B导入大肠杆菌，有利于

质粒B准确复制，稳定保存，方便提取

质粒B准确复制，稳定保存，方便提取

，需要用

CaCl₂（Ca²⁺）

CaCl₂（Ca²⁺）

处理大肠杆菌。
（4）为制备减毒突变株，科研人员将单个突变碱基引入HRSV基因组cDNA质粒克隆中，流程如图2。已知在细菌体内合成的DNA分子有甲基化修饰，通过PCR扩增的DNA链无甲基化修饰。
①DpnⅠ识别甲基化的GATC四个碱基序列，因此其能将

a、b链

a、b链

水解消化掉。在大肠杆菌细胞内完成缺刻修复需要

DNA连接

DNA连接

酶。
②已知质粒B为a个，经过程①扩增15个循环，需要突变引物

15a

15a

个，将过程②形成的产物全部转入大肠杆菌后复制n轮，得到双链突变的DNA

15a•2^n-1

15a•2^n-1

个。