乙肝病毒（HBV）的基因X是乙肝病毒复制和扩散所必需的基因，在乙肝慢性化和肝癌的发生中具有重要作用，如图是乙型肝炎病毒的X基因真核表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达过程，图中所示PUCori为质粒复制原点。请回答下列问题：
（1）酵母是低等真核生物，除了具有细胞生长快，易于培养，遗传操作简单等原核生物具有的特点外，又具有真核生物表达蛋白质后进行的加工、修饰、合理的空间折叠加工、修饰、合理的空间折叠等功能。毕赤酵母菌的质粒带有Zeo基因（博来霉素抗性基因）可作为基因工程中的标记标记基因，用PCR方法扩增X基因序列，此过程需要DNA聚合酶DNA聚合酶酶的催化，并分别在上下游引入XbaⅠ和XhoⅠXbaⅠ和XhoⅠ酶切位点。
（2）双酶切目的基因X与载体，可避免目的基因和载体自连以及目的基因和载体反向连接目的基因和载体自连以及目的基因和载体反向连接，再用DNA连接酶DNA连接酶酶可构建得到HBVX蛋白毕赤酵母表达载体。将毕赤酵母经山梨醇处理成感受态感受态细胞后，把该表达载体导入毕赤酵母细胞内，可先用博来霉素博来霉素进行筛选后再进行基因X的检测和鉴定，采用DNA分子杂交DNA分子杂交技术，用同位素标记的目的基因X同位素标记的目的基因X做探针，若结果显示了杂交带，表明目的基因X进入了毕赤酵母细胞内；经过抗原-抗体杂交抗原-抗体杂交技术结果显示含有重组毕赤酵母可以分泌表达X蛋白。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】加工、修饰、合理的空间折叠；标记；DNA聚合酶；XbaⅠ和XhoⅠ；目的基因和载体自连以及目的基因和载体反向连接；DNA连接酶；感受态；博来霉素；DNA分子杂交；同位素标记的目的基因X；抗原-抗体杂交
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：24引用：3难度：0.7
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
3．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
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