荧光蛋白（GFP）在紫外光下会发出绿色荧光，某科研团队将GFP基因插入质粒P中构建了重组质粒载体P0，用于基因工程中基因表达载体（P1）的筛选和鉴定。部分过程如图所示，如表为部分限制酶的识别序列及切割位点。回答问题：
| 限制酶 | EcoRⅤ | Sau3AⅠ | BamHⅠ |
| 识别序列及切割位点 | CTA↓TAG GTA↑TAG |
↓GATC CATG↑ |
G↓GATCC CCTAG↑G |
平
平
末端，过程②表示利用PCR技术扩增目的基因，前提是要根据 一段已知目的基因的核苷酸序列
一段已知目的基因的核苷酸序列
设计出引物，此外还需在引物的一端加上 GATC
GATC
序列，以便于P1的构建和筛选。（2）过程③中，质粒P0需用限制酶
BamHⅠ
BamHⅠ
切割，才能与扩增出的目的基因在 DNA连接
DNA连接
酶作用下形成P1。（3）为了筛选出含有质粒P1的菌落，需采用添加
四环素
四环素
的培养基平板进行培养，在紫外光激发下 不发出绿色荧光
不发出绿色荧光
的菌落，即为含有P1的菌落。（4）提取经上述筛选所得菌落的RNA，通过
逆转录（反转录）
逆转录（反转录）
获得DNA，再进行PCR扩增，若最终未能检测出目的基因，可能的原因是 目的基因未能在受体菌中转录
目的基因未能在受体菌中转录
。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】平；一段已知目的基因的核苷酸序列；GATC；BamHⅠ；DNA连接；四环素；不发出绿色荧光；逆转录（反转录）；目的基因未能在受体菌中转录
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：18引用：2难度：0.7
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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