利用基因工程技术培育出油脂高产的四尾栅藻，是获取生物柴油的新途径。科学家欲从紫苏中提取DGAT1基因（催化油脂合成的关键酶基因），导入到四尾栅藻细胞，获得转基因油脂高产的四尾栅藻，流程如图。质粒pCAMBIA与PCR扩增出的DGAT1的酶切位点如图所示（图1）。现有BamHⅠ、BglⅡ、EcoRⅠ三种限制性内切核酸酶，它们识别并切割的碱基序列如下表，请回答下列问题：

BamHⅠ	5′G↓GATCC3′
BglⅡ	5′A↓GATCT3′
EcoRⅠ	5′G↓AATTC3′

（1）①与②过程使用的酶分别是

逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶

逆转录酶和耐高温的DNA聚合酶

。
（2）将DGAT1与pCAMBLA分别用限制酶切割后进行连接可形成重组质粒，目的基因和质粒能连接成重组质粒的原因是

有相同的黏性末端可发生碱基互补配对

有相同的黏性末端可发生碱基互补配对

。将重组质粒导入大肠杆菌后，可向培养基中加入

卡那霉素

卡那霉素

筛选出导入质粒的大肠杆菌。
（3）筛选出的重组质粒存在DGAT1基因，但DGAT1在四尾栅藻细胞中表达出的肽链不正确，原因可能是

目的基因反向连接到质粒

目的基因反向连接到质粒

。为进一步筛选出符合要求的重组质粒，选用

EcoRI

EcoRI

限制酶对不同的重组质粒进行酶切处理，得到的电泳结果如图所示（图2），其中

A

A

组重组质粒为所需质粒。