新冠病毒（+RNA）的刺突蛋白S通过与人体黏膜细胞表面的ACE2受体结合而进入细胞，是宿主抗体的重要作用位点。如图1是科研人员利用新冠病毒的+RNA提取S蛋白基因和S蛋白受体结合域RBD基因作为抗原基因序列，研制新冠病毒双抗原疫苗的技术路线。已知PCR1与PCR2要分别进行，然后将产物混合，使用引物1和引物4进行PCR3，最终获得大量S-RBD融合基因（1500bp）。
（1）PCR3过程中，片段1与片段2连接形成S-RBD融合基因，需要使用 耐高温的DNA聚合耐高温的DNA聚合酶。为使S-RBD融合基因能与pX质粒相连接，并在工程菌中表达时先合成S蛋白，则PCR1过程中，应在引物1的5′端添加的限制酶序列是 5′CATATG3′5′CATATG3′。
（2）为初步检测过程B构建是否成功，用EcoRⅠ、NdeⅠ、HindⅢ对重组pX系列质粒进行完全酶切，然后对重组pX系列质粒及其酶切产物进行凝胶电泳检测，结果如图2。据图可知，重组质粒pX2和pX5构建成功的依据是 重组质粒pX2和pX5酶切后形成的1000bp和500bp片段碱基对总和等于S—RBD融合基因长度1500bp重组质粒pX2和pX5酶切后形成的1000bp和500bp片段碱基对总和等于S—RBD融合基因长度1500bp。
（3）在工程菌的筛选时，可先后用两种抗生素进行影印培养实验（即使用无菌的绒毡布压在培养基A的菌落上，带出少许菌种，平移并压在培养基B上），在培养基B中存活的菌落是否含有目的基因 否否（填“是”或“否”）。鉴定重组pX质粒是否导入工程菌还可以采用的方法是 观察菌落是否具有荧光观察菌落是否具有荧光。
（4）试从免疫学角度分析此种双抗原疫苗比常规S蛋白疫苗更具优势的原因 此种双抗原疫苗含有S蛋白受体结合域RBD，有利于进入靶细胞，从而激发细胞免疫此种双抗原疫苗含有S蛋白受体结合域RBD，有利于进入靶细胞，从而激发细胞免疫。
【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】耐高温的DNA聚合；5′CATATG3′；重组质粒pX2和pX5酶切后形成的1000bp和500bp片段碱基对总和等于S—RBD融合基因长度1500bp；否；观察菌落是否具有荧光；此种双抗原疫苗含有S蛋白受体结合域RBD，有利于进入靶细胞，从而激发细胞免疫
【解答】
【点评】
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发布：2024/10/26 12:30:1组卷：15引用：3难度：0.6
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
