[选修3：现代生物科技专题]
玉米是一种重要的食品、饲料以及工业原料，在我国粮食生产安全中占有重要地位。高温胁迫会造成玉米果穗畸形生长，甚至出现空秆无穗，导致产量降低。研究人员获得了一个耐热相关基因ZmCIPKHT并转入玉米，培育出ZmCIPKHT过量表达的耐热玉米。回答下列问题：
（1）扩增获得ZmCIPKHT含有酶切位点的编码区，将质粒与ZmCIPKHT基因用BamHI和BclI进行双酶切：
①采用PCR技术体外扩增ZmCIPKHT基因时，需先根据已知一段ZmCIPKHT基因的碱基序列设计 两种引物两种引物。该技术中需要的酶是 热稳定性DNA聚合酶（或Taq酶）热稳定性DNA聚合酶（或Taq酶）。
②采用双酶切的优点是 防止质粒、目的基因自连现象，防止目的基因和质粒的反向连接防止质粒、目的基因自连现象，防止目的基因和质粒的反向连接。
③ZmCIPKHT基因过量表达的调控与其上游的 启动子启动子序列有关。
（2）重组质粒经鉴定后，转入农杆菌之前，需先用 Ca2+Ca2+处理农杆菌，使其处于感受态；农杆菌可将ZmCIPKHT基因转入到玉米细胞中的原因是 ZmCIPKHT基因插入到农杆菌的Ti质粒的T-DNA序列中，随T-DNA转移到玉米细胞，并且整合到玉米细胞的染色体DNA上ZmCIPKHT基因插入到农杆菌的Ti质粒的T-DNA序列中，随T-DNA转移到玉米细胞，并且整合到玉米细胞的染色体DNA上。
（3）研究人员检测了野生型玉米（WT）和转ZmCIPKHT基因的玉米株系（OE-4，OE-6）中ZmCIPKHT的相对表达量，并对OE-4进行42℃高温胁迫处理，在0、0.5、3和6h分别取样检测ZmCIPKHT基因的表达量，结果如图所示。从分子水平上检测OE-6中是否合成ZmCIPKHT蛋白，常用的方法是 抗原—抗体杂交抗原—抗体杂交。实验结果表明ZmCIPKHT对高温胁迫具有响应，理由是 转ZmCIPKHT基因的植株OE-4经高温处理3h内，ZmCIPKHT基因的相对表达水平明显升高转ZmCIPKHT基因的植株OE-4经高温处理3h内，ZmCIPKHT基因的相对表达水平明显升高。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】两种引物；热稳定性DNA聚合酶（或Taq酶）；防止质粒、目的基因自连现象，防止目的基因和质粒的反向连接；启动子；Ca2+；ZmCIPKHT基因插入到农杆菌的Ti质粒的T-DNA序列中，随T-DNA转移到玉米细胞，并且整合到玉米细胞的染色体DNA上；抗原—抗体杂交；转ZmCIPKHT基因的植株OE-4经高温处理3h内，ZmCIPKHT基因的相对表达水平明显升高
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：0引用：3难度：0.7
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
