人工合成的Bt-Cry5Aa基因编码一种毒蛋白可杀死棉铃虫。研究者将Bt-Cry5Aa基因转入棉花，并对棉花的抗虫性进行鉴定和遗传分析。
（1）用 限制酶和DNA连接酶限制酶和DNA连接酶酶将Bt-Cry5Aa基因与质粒（其标记基因是卡那霉素抗性基因）连接构建重组DNA，然后用 农杆菌转化法/花粉管通道法农杆菌转化法/花粉管通道法法将其导入普通棉花中，获得T0代植株。
（2）提取T0代棉花的总DNA，依据Bt-Cry5Aa基因的碱基序列设计 引物引物，对T0代植株进行PCR检测分析，结果如图。其中4号和6号是 不含目的基因不含目的基因植株的检测结果。将棉铃虫接种于不同株系的植株上，7号植株表现为非抗虫，但PCR检测结果为 阳性/含目的基因阳性/含目的基因，请分析可能的原因是 Bt—Cry5Aa基因突变或Bt—Cry5Aa基因表达效率太低Bt—Cry5Aa基因突变或Bt—Cry5Aa基因表达效率太低。
（3）取T0代抗虫棉自交获得种子，种植后获得T1代植株845株，经卡那霉素点涂叶片（卡那霉素能引起普通植株绿色器官黄化），未出现黄化现象的植株有630株，据此可知抗虫棉与非抗虫棉的比约为 3：13：1，其遗传遵循 基因分离基因分离定律。
（4）提取T1代抗虫植株不同发育时期组织器官的蛋白质，检测毒蛋白的表达量。经检测发现 随着棉花植株的生长发育，植株中的Bt毒蛋白含量下降随着棉花植株的生长发育，植株中的Bt毒蛋白含量下降，说明抗虫棉对棉铃虫的杀虫效果随棉株的生长发育而呈现降低趋势。
（5）综上可知，科研人员在 分子水平和个体分子水平和个体水平上对转基因抗虫棉进行了检测与鉴定。
（6）生产上常将上述转基因棉花与非转基因棉花混合播种，其目的是 减缓害虫种群抗Bt毒蛋白基因频率的增加速度减缓害虫种群抗Bt毒蛋白基因频率的增加速度。
【答案】限制酶和DNA连接酶；农杆菌转化法/花粉管通道法；引物；不含目的基因；阳性/含目的基因；Bt—Cry5Aa基因突变或Bt—Cry5Aa基因表达效率太低；3：1；基因分离；随着棉花植株的生长发育，植株中的Bt毒蛋白含量下降；分子水平和个体；减缓害虫种群抗Bt毒蛋白基因频率的增加速度
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：57引用：1难度：0.3
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
