如图是将乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程示意图。巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母，能将甲醇作为其唯一碳源，此时AOX1基因受到诱导而表达，图中pPIC9K质粒上5′AOX1和3′AOX1（TT）分别是基因AOX1的启动子和终止子。该酵母菌体内无天然质粒，科学家改造出了图1所示质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达。请回答：
（1）用PCR技术扩增HBsAg基因时原料是 脱氧核苷酸（dNTP）脱氧核苷酸（dNTP），Taq酶需要 Mg2+Mg2+激活。
（2）为实现HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，设计引物时需要在引物的 5’5’端添加相应限制酶的识别序列，则在HBsAg基因两侧的A和B位置添加的碱基序列分别是 TACGTATACGTA、CCTAGGCCTAGG，这样设计的优点是 避免目的基因反向接入质粒（保证目的基因定向接入质粒）避免目的基因反向接入质粒（保证目的基因定向接入质粒）。
（3）酶切获取HBsAg基因后，需用 T4DNA连接酶T4DNA连接酶（填“E.coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）将其连接到pPIC9K质粒上，形成重组质粒，构建重组质粒的目的是 让目的基因在受体细胞中稳定存在和遗传，并使目的基因能够表达和发挥作用让目的基因在受体细胞中稳定存在和遗传，并使目的基因能够表达和发挥作用。
（4）若用限制酶SnaBⅠ、BglⅡ联合酶切pPIC9K质粒，获得的DNA片段的长度分别是38kb、27kb、67kb；用限制酶BglⅡ、AvrⅡ联合酶切pPIC9K质粒，得到的DNA片段的长度分别是38kb、40kb、54kb；已知HBsAg基因长度是55kb。步骤3中应选用限制酶 BglⅡBglⅡ来切割重组质粒以获得重组DNA，切割后的重组DNA的长度是 136kb136kb。
（5）转化的酵母菌在培养基上培养一段时间后，需要向其中加入甲醇，其目的是 诱导HBsAg基因表达诱导HBsAg基因表达。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】脱氧核苷酸（dNTP）；Mg2+；5’；TACGTA；CCTAGG；避免目的基因反向接入质粒（保证目的基因定向接入质粒）；T4DNA连接酶；让目的基因在受体细胞中稳定存在和遗传，并使目的基因能够表达和发挥作用；BglⅡ；136kb；诱导HBsAg基因表达
【解答】
【点评】
声明：本试题解析著作权属菁优网所有，未经书面同意，不得复制发布。
发布：2024/6/27 10:35:59组卷：2引用：2难度：0.6
相似题
-
1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7 -
3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
