为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种．
（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用PCRPCR法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因．在上述引物设计时，分别在引物中加入如图甲所示酶的识别序列，这样可以用ClaⅠ限制酶和DNA连接ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后，得到A、DA、D端（填图中字母）相连的融合基因．
（2）将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T-DNA中，构建表达载体表达载体并导入农杆菌中．将获得的农杆菌接种在含四环素四环素的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体液体培养基振荡培养，可以得到用于转化的侵染液．
（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜．
（4）提取上述转基因油菜的mRNA，在逆转录逆转录酶的作用下获得cDNA，再依据融合基因融合基因的DNA片段设计引物进行扩增，对扩增结果进行检测，可判断融合基因是否完成转录转录．
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】PCR；ClaⅠ限制酶和DNA连接；A、D；表达载体；四环素；液体；利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞；逆转录；融合基因；转录
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：70引用：8难度：0.3
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