种子大小是作物重要的产量性状。研究者对野生型拟南芥（2n=10）进行诱变，筛选到一株种子增大的突变体。通过遗传分析和测序，发现野生型DAI基因发生一个碱基G到A的替换，突变后的基因为隐性基因，据此推测突变体的表型与其有关，开展相关实验。
回答下列问题：
（1）拟采用农杆菌转化法将野生型DAI基因转入突变体植株，若突变体表型确由该突变造成，则转基因植株的种子大小应与

野生型

野生型

植株的种子大小相近。
（2）用PCR反应扩增DAI基因，用限制性核酸内切酶对PCR产物和

运载体

运载体

进行切割，用DNA连接酶将两者连接。为确保插入的DAI基因可以正常表达，其上下游序列需具备

启动子和终止子

启动子和终止子

。
（3）转化后，T-DNA（其内部基因在减数分裂时不发生交换）可在基因组单一位点插入也可以同时插入多个位点。在插入片段均遵循基因分离及自由组合定律的前提下，选出单一位点插入的植株，并进一步获得目的基因稳定遗传的植株（图1）。用于后续验证突变基因与表型的关系。

①农杆菌转化T₀代植株并自交，将T₁代种子播种在选择培养基上，能够萌发并生长的阳性个体即表示其基因组中插入了

DAI基因和卡那霉素抗性基因

DAI基因和卡那霉素抗性基因

。
②T₁代阳性植株自交所得的T₂代种子按单株收种并播种于选择培养基，选择阳性率约

75

75

%的培养基中幼苗继续培养。
③将②中选出的T₂代阳性植株

自交

自交

（填“自交”、“与野生型杂交”或“与突变体杂交”）所得的T₃代种子按单株收种并播种于选择培养基，阳性率达到

100

100

%的培养基中的幼苗即为目标转基因植株。
为便于在后续研究中检测该突变，研究者利用PCR扩增野生型和突变型基因片段，再使用限制性核酸内切酶X切割产物，通过核酸电泳即可进行突变检测，相关信息见图2，在图2电泳图中将酶切结果对应位置的条带涂黑。