心脑血管疾病引发的血栓并发症严重威胁人类生命，居各种疾病死亡率首位。临床上常用组织型纤溶酶原激活剂作为溶解血栓、抢救心肌梗死患者的特效药。然而，t-PA因注射剂量大容易诱发颅内出血，为了提高t-PA临床应用的可行性，科学家研发了一种颅内出血倾向大幅度降低的优质t-PA突变蛋白。据此回答下列问题：
（1）人t-PA由527个氨基酸构成（如下图所示），基础研究显示，将t-PA第84位的半胱氨酸替换为丝氨酸，所形成的突变蛋白溶解血栓有效性明显提高。对t-PA的改造必须通过 基因修饰（或基因合成）基因修饰（或基因合成）获得t-PA突变基因而不是直接改造蛋白质。
（2）t-PA突变基因最终需要与P质粒重组才能构建基因表达载体。P质粒DNA分子上有①复制原点，可以保证B质粒在受体细胞中能 自我复制自我复制；②多个限制酶切位点，便于 目的基因（外源DNA）的插入目的基因（外源DNA）的插入；③标记基因和相关的启动子。
（3）基因表达载体进入受体细胞中并在细胞内维持稳定和表达的过程称为 转化转化。
（4）为检测t-PA基因是否导入受体细胞，可采用 DNA分子杂交DNA分子杂交进行检测。除此之外，还可以使用PCR技术，实验组以待测样本DNA为模板，使用引物1：5′-TACCAAGTGATCTGCAGA-3′、引物2：5’-TCGCATGTTGTGACGAAT-3’5’-TCGCATGTTGTGACGAAT-3’（填引物的核苷酸序列）进行PCR扩增；同时以 以t-PA突变基因片段为模板以t-PA突变基因片段为模板模板的组别作为阴性对照组。若 实验组与阳性对照组的结果一致，且阴性对照组无扩增产物实验组与阳性对照组的结果一致，且阴性对照组无扩增产物，说明目的基因导入成功。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】基因修饰（或基因合成）；自我复制；目的基因（外源DNA）的插入；转化；DNA分子杂交；5’-TCGCATGTTGTGACGAAT-3’；以t-PA突变基因片段为模板；实验组与阳性对照组的结果一致，且阴性对照组无扩增产物
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：6引用：1难度：0.6
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
3．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
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