将外源多酚氧化酶基因（POT33）的同源片段与载体结合，构建反义表达载体，通过基因工程技术导入马铃薯，产生的反义RNA可有效降低马铃薯内源多酚氧化酶基因的表达水平，从而改善薯块的损伤褐化现象，提高马铃薯的食用和加工品质。回答下列相关问题：
（1）获取马铃薯POT33基因的同源片段：根据马铃薯POT33基因的 核苷酸的排列顺序核苷酸的排列顺序设计一对特异性引物，在引物的5′端加入限制性内切核酸酶的 识别序列识别序列以满足目的基因连接到载体的需要，再通过PCR获取马铃薯POT33基因的同源片段。
（2）构建重组载体：用限制性内切核酸酶分别处理 目的基因和载体目的基因和载体，处理过程中用两种限制酶，可以防止目的基因以及载体的 自身环化自身环化，保证POT33基因同源片段与载体的反向连接，形成反义表达载体。
（3）马铃薯转化、选择及再生：以马铃薯无菌苗的叶片为外植体，一般可借助 农杆菌农杆菌实现马铃薯的遗传转化，再将被转化的叶片放在含抗生素的培养基上培养，加入的抗生素具有筛选转化细胞和 杀灭农杆菌杀灭农杆菌的双重作用；之后对脱分化形成的愈伤组织每隔适当时间进行 继代继代培养，后可通过调控培养基中 植物生长调节剂和营养物质的种类和浓度植物生长调节剂和营养物质的种类和浓度以获得符合要求的再生植株。
【考点】基因工程的操作过程综合；植物的组织培养．
【答案】核苷酸的排列顺序；识别序列；目的基因和载体；自身环化；农杆菌；杀灭农杆菌；继代；植物生长调节剂和营养物质的种类和浓度
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：9引用：1难度：0.7
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
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发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7 -
3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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