B基因存在于水稻基因组中，仅在体细胞（2n）和精子中正常表达，在卵细胞中不转录。为研究B基因表达对卵细胞的影响，设计了如下图所示的实验来获取能够在卵细胞中表达B基因的转基因植株。请据图回答下列问题：
（1）从水稻体细胞中提取总RNA，在 逆转录逆转录酶的催化下构建 cDNAcDNA文库，进而获得B基因编码蛋白的序列。Luc基因是荧光素酶基因，能催化荧光素产生荧光。B-Luc融合基因形成过程中需要的酶是 限制酶和DNA连接酶限制酶和DNA连接酶。
（2）融合基因必须连接到启动子和终止子之间，其中启动子是 RNA聚合酶RNA聚合酶的结合位点。图中卡那霉素抗性基因的作用是 作为标记基因，检测B-Luc融合基因是否导入农杆菌细胞作为标记基因，检测B-Luc融合基因是否导入农杆菌细胞。
（3）过程①最常用的方法是 农杆菌转化法农杆菌转化法；若借助Luc基因的表达产物来完成图中第二次鉴定筛选，则具体方法是 检测加入荧光素的细胞中是否发出荧光检测加入荧光素的细胞中是否发出荧光。
（4）从转基因水稻植株未成熟种子中分离出胚，观察到细胞内仅含一个染色体组，判定该胚是由未受精的卵细胞发育形成的，而一般情况下水稻卵细胞在未受精时不进行发育，由此表明 B基因表达能使卵细胞不经受精直接发育成胚B基因表达能使卵细胞不经受精直接发育成胚。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】逆转录；cDNA；限制酶和DNA连接酶；RNA聚合酶；作为标记基因，检测B-Luc融合基因是否导入农杆菌细胞；农杆菌转化法；检测加入荧光素的细胞中是否发出荧光；B基因表达能使卵细胞不经受精直接发育成胚
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：3引用：2难度：0.7
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
