苯丙酮尿症是单基因遗传病，科学家将正常基因D导入该病患者的细胞，以治疗该病。图甲为A、B、C三种质粒，图乙为含有目的基因D的DNA片段，图丙为重组载体的示意图。Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，LacZ基因编码产生的酶可以分解物质X-gal,从而使菌落显现出蓝色。若无该基因或该基因被破坏，则菌落呈白色。，EcoRI（0.6Kb）、PvuI（0.8Kb）为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离。回答下列问题：
（1）基因工程操作的核心步骤是 基因表达载体的构建基因表达载体的构建。图甲中三种质粒适宜作为运载体的是质粒 BB。
（2）获取目的基因D时应选择乙图中的 PvuⅠPvuⅠ对其所在的DNA进行切割。
（3）将目的基因D和甲图中相应质粒连接后，得到图丙中三种方式。为选出正向连接的重组质粒，使用 EcoRⅠEcoRⅠ对质粒完全酶切后，进行电泳分析。若是正向连接载体，电泳图谱中出现长度为 1.21.2Kb和 5.55.5Kb两条带。
（4）利用自身不含lacZ基因且对抗生素敏感的大肠杆菌作为受体细胞，要在已转化的含重组质粒、已转化的含空质粒的受体细胞和未转化成功的细胞中筛选出已转化的含重组质粒的受体细胞的方法是在含有 氨苄青霉素氨苄青霉素和 X-galX-gal的培养基上培养，形成 白色白色（填“蓝色”或“白色”）菌落的为导入重组质粒的受体细胞。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】基因表达载体的构建；B；PvuⅠ；EcoRⅠ；1.2；5.5；氨苄青霉素；X-gal；白色
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：3引用：1难度：0.7
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
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