为提高作物产量，种植业往往使用大量的氮素化肥，既增加了生产成本，又易造成环境污染。自生固氮菌营独立生活，为改变这种现状带来了希望。某科研小组利用下面的培养基尝试从土壤中分离固氮能力强的自生固氮菌，以便生产菌肥替代传统化肥。请回答下列问题：
培养基配方表：

成分	葡萄糖	KH2PO4	MgSO4	NaCl	CaSO4	CaSO3	琼脂	蒸馏水
用量	10g	0.2g	0.2g	0.2g	0.2g	5g	3.5g	1L

（1）配制培养基时，按配方表称量、溶化、定容后需经

高压蒸汽灭菌

高压蒸汽灭菌

法灭菌后再倒平板。此培养基能分离自生固氮菌的原因是

该培养基无氮源，只有固氮菌才能在此培养基上生长

该培养基无氮源，只有固氮菌才能在此培养基上生长

。
（2）为分离纯化自生固氮菌及观察自生固氮菌的菌落特征，需将土样经

梯度稀释

梯度稀释

后，用灭菌后的

接种环

接种环

（填接种工具名称）采用

平板划线法

平板划线法

 将菌液接种到平板上培养。
（3）已知固氮酶的化学本质为蛋白质，不同的蛋白质在不同浓度的盐溶液中溶解度不同。为检测分离得到的自生固氮菌的固氮酶活性，可将固氮菌细胞破碎后采用

盐析

盐析

法 分离出固氮酶，该方法的优点是

既能分离出固氮酶，又不会破坏固氮酶的结构而保持其活性

既能分离出固氮酶，又不会破坏固氮酶的结构而保持其活性

。
（4）研究发现，土壤中碳含量降低，碳氮比低于40：1时，固氮菌的固氮作用迅速停止。因此纯化后制作的优良菌肥最好与

有机肥

有机肥

 （填“氮肥”“磷肥”“钾肥”或“有机肥”）配合施用。