径柳匙叶草是一种泌盐植物。科研工作者将径柳匙叶草液泡膜Na⁺/K⁺逆向转运蛋白基因（TaNHX2基因）转移到棉花细胞内，获得了转基因耐盐棉花新品种。如图1是获取的含有目的基因的DNA片段，Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ为三种限制酶，图中箭头所指为三种限制酶的切点；如图2是三种限制酶的识别序列与酶切位点示意图；如图3是土壤农杆菌中用于携带目的基因的Ti质粒结构示意图。请分析回答问题：

（1）不能在径柳匙叶草根尖分生区细胞中获得TaNHX2基因的mRNA，其原因是

基因的选择性表达（径柳匙叶草根尖分生区细胞中TaNHX2基因不能表达）

基因的选择性表达（径柳匙叶草根尖分生区细胞中TaNHX2基因不能表达）

。
（2）若用BamHⅠ切割图1所示的DNA片段，获取目的基因，则需选用

Sau3AⅠ

Sau3AⅠ

切割图3所示质粒，以便构建基因表达载体，请写出两个黏性末端连接后的碱基序列：

，该序列能不能被图2中某种酶识别，如果能，请写出酶的名称：

Sau3AⅠ

Sau3AⅠ

。简述该方案的缺陷是

出现目的基因和质粒的自我环化

出现目的基因和质粒的自我环化

。
（3）参考上问，故切割图1所示DNA片段的最佳方案是选用

EcoRⅠ和BamHⅠ

EcoRⅠ和BamHⅠ

酶。图1所示一个DNA片段被完全酶切后会产生

5

5

个DNA片段。
（4）图3中，启动子可以被

RNA聚合酶

RNA聚合酶

识别，终止子序列的基本单位是

脱氧核苷酸

脱氧核苷酸

。
（5）为了检测技术成果，科研工作者在个体水平的检测方法是

将转基因棉花种植在盐碱地，观察其生长状况

将转基因棉花种植在盐碱地，观察其生长状况

。
（6）若已知TaNHX2基因的两端部分序列为：5′-AACTATGCGC……CGTAGCCTCT-3′，请写出PCR扩增该基因时的两个引物对应的局部序列（前5个碱基序列），并标明5′和3′端：

5'-AACTA-3'

5'-AACTA-3'

，

5'-AGAGG-3'

5'-AGAGG-3'

。