酵母细胞基因转录需要转录因子，转录因子包括DNA结合功能域（DNA-BD）和转录激活结构域（DNA-AD），两结构域分开时不能激活转录。如果将待测蛋白质X与DNA-BD融合，蛋白质Y与DNA-AD融合，蛋白质X和Y有相互作用时，两结构域能重新呈现完整转录因子活性，并可激活报告基因的转录，过程如图1所示。已知报告基因LacZ表达的酶可以将无色化合物X-gal水解成蓝色产物。研究人员为了验证蛋白质X和Y是否具有相互作用，分别构建不同的酵母表达载体（如图2和图3所示），其中Ampr为氨苄青霉素（抑制细菌细胞壁的形成）抗性基因，HIS3和TRPⅠ分别为控制组氨酸和色氨酸合成的基因。请回答下列问题：
（1）研究小组采用了巢式PCR技术获取蛋白质X和Y基因的编码区序列，技术原理是利用两套PCR引物进行两轮PCR扩增（如图4所示），首先利用第一对引物（外引物）对目的基因所在DNA进行15～30个循环的扩增；第二轮扩增以第一轮扩增产物为模板，利用第二对引物（内引物或巢式引物）进行15～30个循环扩增。相比于常规PCR获得的产物而言，巢式PCR获得的产物特异性 强强（“强”或“弱”），原因是 如果利用外引物扩增产生了错误片段，再利用内引物扩增在错误片段上进行引物配对并扩增的概率低如果利用外引物扩增产生了错误片段，再利用内引物扩增在错误片段上进行引物配对并扩增的概率低。
（2）研究人员的主要技术路线如表所示，请完善下表：
| 实验目的 | 方法步骤要点（部分） |
| 获取X和Y基因的编码区序列 | 巢式PCR扩增蛋白质Y编码区序列时需在两个① 内 内 （填写“内”、“外”或“内和外”）引物的5ˈ端分别添加序列②GAATTC 和 CTCGAG GAATTC 和 CTCGAG ；为验证目的基因在PCR扩增时是否发生了基因突变，可对PCR产物进行③DNA 测序（测序） DNA 测序（测序） 。 |
| pLexA-JL和pB42AD载体的构建 | 用特定限制酶切割目的基因和载体并连接，连接产物导入大肠杆菌后扩增；为确定质粒构建是否成功，需要抽提两种质粒并酶切， 电泳后观察④ 是否出现预期大小的目标条带 是否出现预期大小的目标条带 。 |
| 转化酵母细胞 | 将成功构建的载体通过⑤ Ca2+处理（感受态细胞） Ca2+处理（感受态细胞） 法导入到营养缺陷型酵母菌中，培养基中需添加物质有⑥def def （用下列字母填写）。a.氨苄青霉素 b.色氨酸 c.亮氨酸 d.X-gal e.琼脂 f.甲硫氨酸 |
| 实验验证 | 通过观察培养基中⑦ 菌落的颜色（菌落是否呈现蓝色） 菌落的颜色（菌落是否呈现蓝色） 来验证蛋白质X和Y是否具有相互作用。 |
AD
AD
。A.在细胞体内检测抗原和抗体能否发生相互作用
B.判断控制某一性状的两对基因是否能够独立遗传
C.判断RNA聚合酶与某启动子的结合是否具有组织特异性
D.筛选宿主细胞上能与新冠病毒S刺突蛋白特异性结合的受体
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定；遗传信息的转录和翻译．
【答案】强；如果利用外引物扩增产生了错误片段，再利用内引物扩增在错误片段上进行引物配对并扩增的概率低；内；GAATTC 和 CTCGAG；DNA 测序（测序）；是否出现预期大小的目标条带；Ca2+处理（感受态细胞）；def；菌落的颜色（菌落是否呈现蓝色）；AD
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：29引用：1难度：0.6
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1．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
2．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：4引用：3难度：0.7
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