我国餐厨垃圾占城市生活垃圾比重的37%～62%，垃圾废液中富含淀粉、蛋白质、脂类等有机物，丢弃处理是一种资源的浪费，而且处理不当还会滋生病原菌，污染环境。研究人员采集废弃垃圾液通过生物工程技术分离出了能高效降解淀粉、蛋白质、脂肪等成分的菌种制成复合微生物菌剂，实现垃圾无害化处理和资源化的高效利用。回答下列问题：
（1）菌种的选育。按照如图1流程分别分离获得高效分解淀粉、蛋白质、脂肪的菌种：

①采集废弃垃圾液作为分离样本，给我们提供的取样思路是

从菌种生存环境中取样

从菌种生存环境中取样

，土样采集后进行富集培养，目的是

对目标菌种扩增，提高其所占比例，有利于分离获得菌种

对目标菌种扩增，提高其所占比例，有利于分离获得菌种

。
②完成梯度稀释后，菌种接种到平板上的过程需要使用的工具为

移液器和玻璃刮刀（涂布器，三角刮刀）

移液器和玻璃刮刀（涂布器，三角刮刀）

，与普通营养物质不同，厨余垃圾多来自烹饪余留，因此在分离培养基中宜提高

氯化钠（高盐）

氯化钠（高盐）

含量配制成

选择性

选择性

（功能）培养基，更能实现菌株的分离。纯化培养采用的接种方法是

平板划线法

平板划线法

。
（2）厨余垃圾处理的混菌发酵。用上述方法分别选育出高效分解淀粉、蛋白质和脂肪的菌种后，将三类菌按照一定的比例制成复合微生物菌剂，再将菌剂与经过预处理的厨余垃圾混合发酵。
①发酵过程中影响垃圾分解效率的因素除温度、pH、溶解氧等环境因素外，还有

菌种类型、菌种的配比、菌液浓度、垃圾种类、垃圾浓度等

菌种类型、菌种的配比、菌液浓度、垃圾种类、垃圾浓度等

（至少列举2项）
②发酵过程不仅能将垃圾无害化，同时还能通过

沉淀、过滤、离心

沉淀、过滤、离心

技术从发酵液分离获得丰富的单细胞蛋白，实现垃圾的资源化。
③收集微生物处理后的厨余垃圾残渣，经晾晒干后制成饲料，可实现

能量的多级利用

能量的多级利用

，提高能量利用率。
（3）超级分解菌的培育。研究发现，混菌发酵过程中各种菌存在相互作用，导致分解效率低下，因此科研人员尝试获取能表达淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶的融合基因（图2），利用一种高效表达质粒的载体（图3），将其导入到巨大芽孢杆菌中，提高厨余垃圾的分解率。现有MspⅠ，BamHⅠ.Mbol、SmaⅠ、BglⅡ等限制酶，它们的识别序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG、A↓GATCT。
①分别选择

Mbol和BamHI

Mbol和BamHI

酶切割融合基因和质粒（各选用一种酶），然后使用

DNA连接

DNA连接

酶连接形成重组质粒。若使用MspⅠ酶对重组质粒进行充分酶切，每个重组质粒至少能水解为

3

3

个片段。
②采用感受态细胞法将重组质粒导入巨大芽孢杆菌后，将受体菌培养在添加

抗生素B

抗生素B

的培养基进行检测筛选，即可获得能同时高效降解厨余垃圾的超级分解菌。