研究人员从土壤中分离获得能分解纤维素的细菌（A菌），从A菌中提取一种纤维素酶基因（CBHⅡ）并进行PCR扩增，然后与高效表达载体pUT质粒（图1）连接构建成重组质粒并导入A菌，从而获得分解纤维素能力更强的工程菌（B菌）。回答下列问题：

（1）采用PCR技术扩增CBHⅡ基因时需要根据

CBHⅡ基因两端的碱基（核苷酸）序列

CBHⅡ基因两端的碱基（核苷酸）序列

设计引物，每一轮扩增耐高温的DNA聚合酶都从子链的

3'

3'

（填“3′”或“5′”）端将子链延伸。
（2）图1中pUT质粒上的高效表达启动子的作用是

启动目的基因（CBHⅡ基因）的转录

启动目的基因（CBHⅡ基因）的转录

，CBHⅡ基因两端需添加相关酶切位点（有关限制酶的识别序列和酶切位点如上表所示）才能与pUT质粒连接，因此在扩增CBHⅡ基因时，需要在两种引物上分别添加

AGATCT

AGATCT

序列和

GGTAACC

GGTAACC

序列。
（3）为鉴定重组质粒是否构建成功，将重组质粒导入A菌，并将其接种在含

抗生素N

抗生素N

的培养基上培养，然后提取3个不同菌落的质粒分别进行双酶切验证将酶切片段和CBHⅡ基因分别进行电泳，结果如图2所示。据图分析，菌落

2，3

2，3

中成功导入了重组质粒，理由是

菌落2、3的质粒经双酶切后电泳条带中都有与CBHⅡ基因相同的条带

菌落2、3的质粒经双酶切后电泳条带中都有与CBHⅡ基因相同的条带

。