基因敲减主要是指从转录水平或翻译水平使基因表达失活的技术，其中RNA干扰技术是常用的基因敲减技术，该技术首先要根据目的基因序列设计出反义RNA和正义RNA构建成双链RNA（shRNA），然后用相关酶切割shRNA形成反义RNA片段，其可与目的基因转录的mRNA碱基互补配对，进而诱导相关酶水解mRNA，实现对基因的敲减。为检测设计出的shRNA是否能成功敲减基因还需要利用荧光酶报道基因系统进行验证。如图1表示敲减载体构建，图2表示荧光酶报道基因系统检测的原理。
（1）据图1分析，若要从含shRNA基因的DNA分子中扩增出shRNA基因并能使其在受体细胞中表达，需要用到的引物是 引物2、引物5引物2、引物5，为使扩增出的shRNA基因能够和质粒构建敲减载体，在设计引物时需在引物的 5'5'（填5'或3'）端分别添加 BamHⅠ、HindⅢBamHⅠ、HindⅢ酶能够识别的序列。
（2）已知mRNA末端缺失会导致mRNA水解。荧光酶报道基因与欲敲减的目的基因串联可构成荧光酶报道基因系统，荧光酶报道基因与目的基因的连接点是终止密码子对应的序列，而不是终止子，其原因是 转录过程在终止子处会终止，若连接点为终止密码子对应的序列则不能实现两基因的mRNA的串联转录过程在终止子处会终止，若连接点为终止密码子对应的序列则不能实现两基因的mRNA的串联。
（3）荧光酶报道基因系统与敲减载体一同导入受体细胞中可以根据荧光的有无检测敲减载体是否成功，其机理是 若敲减载体能够敲除目的基因，则荧光酶报道基因和目的基因转录形成的mRNA会被水解，荧光酶报道基因不能正常表达，无法检测到荧光出现若敲减载体能够敲除目的基因，则荧光酶报道基因和目的基因转录形成的mRNA会被水解，荧光酶报道基因不能正常表达，无法检测到荧光出现。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】引物2、引物5；5'；BamHⅠ、HindⅢ；转录过程在终止子处会终止，若连接点为终止密码子对应的序列则不能实现两基因的mRNA的串联；若敲减载体能够敲除目的基因，则荧光酶报道基因和目的基因转录形成的mRNA会被水解，荧光酶报道基因不能正常表达，无法检测到荧光出现
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：28引用：2难度：0.6
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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