人体肝脏细胞中的乙醛脱氢酶2（ALDH2）是人体酒精代谢中的关键酶。研究人员利用定点诱变技术对ALDH2基因进行改造后在大肠杆菌中表达，获得具有较好溶解性的乙醛脱氢酶2。所用质粒和操作过程如图。其中，Ampr为氨苄青霉素抗性基因，Tetr为四环素抗性基因。质粒的外侧链为a链，内侧链为b链。基因Tetr转录的模板链属于b链的片段。改造后的ALDH2基因编码区首端到末端（其中一条链）的序列为5'-ATCCATGCGCTC…（中间核苷酸序列）CAGTGAGTAGCG-3'。四种限制酶的识别序列及切割位点见表。
| 限制酶 | BamHⅠ | PstⅠ | XhoⅠ | XbaⅠ |
| 识别序列和切割位点（5'→3'） | G↓GATCC | C↓TGCAG | C↓TCGAG | T↓CTAGA |
不存在
不存在
（选填“存在”或“不存在”）的蛋白质。（2）基因Amp'转录的模板链属于
a
a
链的片段，质粒复制的模板链是 a和b
a和b
链。（3）过程②需要的限制酶是
BamHⅠ、XbaⅠ
BamHⅠ、XbaⅠ
，选择依据是 Tetr（四环素抗性基因）中存在PstⅠ和XhoI的识别序列，会将Tetr切断，导致大肠杆菌不能在含四环素的培养基上存活；选择BamHⅠ和XbaⅠ两种酶切能避免质粒、目的基因自身环化且实现目的基因定向拼接
Tetr（四环素抗性基因）中存在PstⅠ和XhoI的识别序列，会将Tetr切断，导致大肠杆菌不能在含四环素的培养基上存活；选择BamHⅠ和XbaⅠ两种酶切能避免质粒、目的基因自身环化且实现目的基因定向拼接
。过程③常采用 Ca2+
Ca2+
处理以提高操作效果。经过程④，在培养基上能形成菌落的大肠杆菌类型有 导入空白质粒和导入重组质粒两种类型
导入空白质粒和导入重组质粒两种类型
。（4）为扩增上图中改造的ALDH2基因，某同学设计了如下六种PCR引物，其中可选用（符合题意）的一对引物是
①⑤
①⑤
（选填数字序号）。根据选定的引物，经过4次循环，最多可获得 8
8
个符合要求的目的基因。①5'-TCTAGACGCTACTCACTG-3'
②5'-TCTAGAATCCATGCGCTC-3'
③5'-CTGCAGATCCATGCGCTC-3'
④5'-GGATCCCGCTACTCACTG-3'
⑤5'-GGATCCATCCATGCGCTC-3'
⑥5'-CTCGAGCGCTACTCACTG-3'
【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】不存在；a；a和b；BamHⅠ、XbaⅠ；Tetr（四环素抗性基因）中存在PstⅠ和XhoI的识别序列，会将Tetr切断，导致大肠杆菌不能在含四环素的培养基上存活；选择BamHⅠ和XbaⅠ两种酶切能避免质粒、目的基因自身环化且实现目的基因定向拼接；Ca2+；导入空白质粒和导入重组质粒两种类型；①⑤；8
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：29引用：5难度：0.6
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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