CRISPR/Cas9系统基因编辑技术是近年来颇受关注的一项新技术。该基因表达系统主要包含引导RNA和Cas9蛋白两个部分，引导RNA能识别并结合特定的DNA序列，从而引导Cas9蛋白结合到相应位置并剪切DNA，最终实现对靶基因序列的编辑。研究人员试图用CRISPR/Cas9系统对水稻产量基因Q基因进行编辑，请回答下列问题：
（1）研究发现，CRISPR/Cas9仅存在于原核生物，故需借助转基因转基因技术才能在水稻细胞中发挥作用。Cas9蛋白与限制酶限制酶酶的功能相似。
（2）首先依据Q基因Q基因的部分序列设计DNA片段A（负责编码相应引导RNA），再将片段A与含有Cas9基因的质粒B连接，以构建编辑水稻Q基因的CRISPR/Cas9系统基因表达载体（如图所示）。位点Ⅰ、位点Ⅱ分别表示酶切位点KpnⅠ、BamHⅠKpnⅠ、BamHⅠ。
（3）质粒B大小为2.5kb（位点Ⅰ与位点Ⅱ相隔60b），经酶切后的片段A大小为0.5kb（千碱基对），连接形成的表达载体大小为2.94kb2.94kbkb。
（4）常用农杆菌转化法将目的基因导入水稻受体细胞，依据农杆菌的侵染特点，目的基因将插入到Ti质粒的T-DNAT-DNA上，经过转化作用，进入水稻细胞，并将其插入到水稻细胞染色体的DNA上水稻细胞染色体的DNA上，从而使其得以维持稳定和表达。
（5）CRISRP/Cas9基因编辑技术有时存在编辑对象出错而造成脱靶，试从引导RNA的角度分析脱靶的原因其他DNA序列也含有与引导RNA互补配对的序列，造成引导RNA错误结合而脱靶其他DNA序列也含有与引导RNA互补配对的序列，造成引导RNA错误结合而脱靶。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】转基因；限制酶；Q基因；KpnⅠ、BamHⅠ；2.94kb；T-DNA；水稻细胞染色体的DNA上；其他DNA序列也含有与引导RNA互补配对的序列，造成引导RNA错误结合而脱靶
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：39引用：6难度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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