苯丙酮尿症是由PKU基因突变引起的，基因定点整合可以将正常PKU基因定点整合到PKU基因突变的小鼠胚胎干细胞的染色体DNA上，替换突变基因，用于研究该病的治疗。基因定点整合的过程是：从染色体DNA的突变PKU基因两侧各选择一段DNA序列HB1和HB2，根据其碱基序列分别合成HB1和HB2，再将两者分别与基因K1、K2连接，中间插入正常PKU基因和标记基因neor，构建出如图所示的重组载体。重组载体和染色体DNA中的HB1和HB2序列发生交换，导致两者之间区域发生互换（如图）。
（1）构建重组载体时，需采用PCR技术对PKU基因进行扩增，PCR扩增的原理是 DNA复制DNA复制。扩增时，需要先加热至90～95℃使DNA解链后，后冷却至55～60℃的目的是 使引物和模板链互补配对使引物和模板链互补配对。
（2）重组载体中的HB1和HB2之间除了插入正常的PKU基因和neor基因以外，还必须含有 启动子、终止子启动子、终止子。neor基因的作用是 选择出成功导入目的基因的受体细胞选择出成功导入目的基因的受体细胞。
（3）用图中重组载体转化时，会出现一些PKU基因错误整合的胚胎干细胞。错误整合时，载体的两个K基因中至少会有一个与neor基因一起整合到染色体DNA上，已知含有neor基因的细胞具有G418的抗性。K1、K2的产物都能把DHPG转化成有毒物质而使细胞死亡。根据上述信息，设计简要的实验方案从转化的胚胎干细胞中筛选出正确整合的胚胎干细胞 用添加有G418、DHPG的培养液培养整合后的细胞，能存活的是正确整合的胚胎干细胞用添加有G418、DHPG的培养液培养整合后的细胞，能存活的是正确整合的胚胎干细胞。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】DNA复制；使引物和模板链互补配对；启动子、终止子；选择出成功导入目的基因的受体细胞；用添加有G418、DHPG的培养液培养整合后的细胞，能存活的是正确整合的胚胎干细胞
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：15引用：1难度：0.4
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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