大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。
回答下列问题：
（1）利用凝胶色谱法分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7.0、浓度为20mmol/L的

磷酸缓冲液

磷酸缓冲液

到适当高度进行洗脱，结果甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是

甲

甲

蛋白质。
（2）通过滤膜法可以测定自来水中大肠杆菌的数目：一定体积的自来水样过滤后，将滤膜放在伊红-美蓝培养基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红和美蓝水溶液）上培养，大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝反应，使菌落呈黑色。根据培养基上菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。
①伊红-美蓝培养基属于

鉴别

鉴别

（填“选择”或“鉴别”）培养基，蛋白胨的作用有

提供碳源、氮源、维生素

提供碳源、氮源、维生素

（答出两点即可）。
②培养大肠杆菌时，在接种前通常需要检测固体培养基是否被污染，检测方法是

将未接种的培养基在适宜的条件下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落出现

将未接种的培养基在适宜的条件下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落出现

。
③用滤膜法进行测定时，滤膜的孔径应

小于

小于

（填“大于”或“小于”）大肠杆菌。滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是

培养基表现生长的一个菌落来源于样品中的一个活菌

培养基表现生长的一个菌落来源于样品中的一个活菌

。