为生产具有特定性能的α-淀粉酶，研究人员从某种海洋细菌中克隆了α-淀粉酶基因（1656个碱基对），利用基因工程大量制备α-淀粉酶，实验流程见右图。请回答下列问题：
（1）利用PCR技术扩增α-淀粉酶基因前，需先获得细菌的基因组DNA基因组DNA。
（2）为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，需在引物的5′5′端加上限制性酶切位点，且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，主要目的是使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连。使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连。。
（3）进行扩增时，反应的温度和时间需根据具体情况进行设定，下列选项中②②的设定引物有关，⑥⑥的设定与扩增片段的长度有关。（填序号）
①变性温度 ②退火温度 ③延伸温度 ④变性时间 ⑤退火时间 ⑥延伸时间
（4）下图表示筛选获得的工程菌中编码α-淀粉酶的mRNA的部分碱基序列：
图中虚线框内mRNA片段包含88个密码子，如虚线框后的序列未知，预测虚线框后的第一个密码子最多有1313种。
（5）获得工程菌表达的α-淀粉酶后，为探究影响酶活性的因素，以浓度为1%的可溶性淀粉为底物测定酶活性，结果如下：
| 缓冲液 | 50mmol/L Na2HPO4-KH2PO4 | 50mmol/L Tris-HCl | 50mmol/L Gly-NaOH | |||||||||
| pH | 6.0 | 6.5 | 7.0 | 7.5 | 7.5 | 8.0 | 8.5 | 9.0 | 9.0 | 9.5 | 10.0 | 10.5 |
| 酶相对活性% | 25.4 | 40.2 | 49.8 | 63.2 | 70.1 | 95.5 | 99.5 | 85.3 | 68.1 | 63.7 | 41.5 | 20.8 |
pH为8.5，50mmol/LTris-HCl
pH为8.5，50mmol/LTris-HCl
。【考点】探究影响酶活性的条件．
【答案】基因组DNA；5′；使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连。；②；⑥；8；13；pH为8.5，50mmol/LTris-HCl
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：341引用：3难度：0.3
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①图1曲线中的酶促反应速率，可通过测量（指标）来体现。
②据图1分析，板栗壳黄酮对胰脂肪酶活性具有作用。
（3）图2中A显示脂肪与胰脂肪酶活性部位结构互补时，胰脂肪酶才能发挥作用，因此酶的作用具有性。图2中的B和C为板栗壳黄酮对胰脂肪酶作用的两种推测的机理模式图。结合图1曲线分析，板栗壳黄酮的作用机理应为（选填“B”或“C”）。
（4）为研究不同pH条件下板栗壳黄酮对胰脂肪酶活性的影响，科研人员进行了相关实验，结果如图3所示
①本实验的自变量有。
②由图3可知，板栗壳黄酮对胰脂肪酶作用效率最高的pH值约为。加入板栗壳黄酮，胰脂肪酶的最适pH变。
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