胰蛋白酶抑制剂能干扰昆虫的代谢，引起昆虫死亡，但对人体无害。科学家将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因（Pin-Ⅱ）通过农杆菌导入杨树细胞，培育成了抗虫杨树。
注：左图表示含目的基因的DNA分子，下图表示质粒，图中Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Neor表示新霉素抗性基因，复制原点是质粒DNA复制的起点。箭头表示识别序列完全不同的4种限制酶的酶切位点。
回答下列问题：
（1）要获得大量的目的基因，通常采用PCR扩增技术，在PCR扩增仪中已加入了一定的缓冲溶液、含目的基因的DNA分子、Mg2+，还需要加入的物质有 分别与两条模板链结合的2种引物、4种脱氧核苷酸（dNTP）和耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）分别与两条模板链结合的2种引物、4种脱氧核苷酸（dNTP）和耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）。通过PCR技术扩增Pin-Ⅱ基因片段，反应过程一般由95℃热变性、55～60℃引物和模板配对、72℃延伸三个步骤，经过多次循环完成。延伸阶段选用72℃而非95℃综合考虑了两个因素，这两个因素是 防止DNA变性防止DNA变性和 保持Taq酶活性所需温度条件保持Taq酶活性所需温度条件。
（2）图中的质粒在基因工程操作中通常用作载体，能在受体细胞内稳定存在，除含有Ampr，Neor和多个限制酶切位点外，质粒还具有的主要特点是 对受体细胞无害、具有自我复制的能力对受体细胞无害、具有自我复制的能力。
（3）依据图中信息，写出高效构建含Pin-Ⅱ基因片段的重组质粒的简要操作方法：将含目的基因的DNA分子和质粒混合，加入EcoRⅠ和PstⅠ，再加入DNA连接酶，即可构建重组质粒将含目的基因的DNA分子和质粒混合，加入EcoRⅠ和PstⅠ，再加入DNA连接酶，即可构建重组质粒。
（4）用转基因杨树叶片喂养某种杨树害虫，发现害虫死亡率显著增加，与非转基因的杨树细胞相比较，此转基因杨树的叶片细胞中，可以检测到的物质有 胰蛋白酶抑制剂基因胰蛋白酶抑制剂基因、胰蛋白酶抑制剂基因的mRNA胰蛋白酶抑制剂基因的mRNA、胰蛋白酶抑制剂蛋白胰蛋白酶抑制剂蛋白。（写3项）
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】分别与两条模板链结合的2种引物、4种脱氧核苷酸（dNTP）和耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）；防止DNA变性；保持Taq酶活性所需温度条件；对受体细胞无害、具有自我复制的能力；将含目的基因的DNA分子和质粒混合，加入EcoRⅠ和PstⅠ，再加入DNA连接酶，即可构建重组质粒；胰蛋白酶抑制剂基因；胰蛋白酶抑制剂基因的mRNA；胰蛋白酶抑制剂蛋白
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：4引用：2难度：0.6
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
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