农杆菌Ti质粒上的T-DNA（序列已知）可以转移并随机插入被侵染植物的染色体DNA中。研究者将图1中被侵染植物的DNA片段连接成环，并以此环为模板，利用PCR技术扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列，进一步分析可确定T-DNA插入的具体位置。T-DNA的序列如图2所示，虚线处省略了部分核苷酸序列。已知SalⅠ酶的识别序列为5'G↓TCGAC3'。
（1）PCR技术扩增时起关键作用的酶是 Taq酶（或耐高温的DNA聚合酶）Taq酶（或耐高温的DNA聚合酶），其作用是 将游离的脱氧核苷酸连到引物的3'端将游离的脱氧核苷酸连到引物的3'端。
（2）扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列时，需要先根据 T-DNA基因两端已知的碱基序列T-DNA基因两端已知的碱基序列设计两种特异性引物序列，利用图中的引物 ①④①④组合可扩增出T-DNA两侧的未知序列。
（3）若只使用一种引物，通过PCR技术制备与T-DNA的b链相同的单链作为某些检测的探针，则所选择引物由5'→3'的前5个碱基序列为 5′-CTGTC-3′5′-CTGTC-3′。
（4）对PCR产物测序，经分析得到了图1中的未知序列。下列DNA单链序列中（虚线处省略了部分核苷酸序列），可能正确的是 AA。
A．5'-TCGACCACG_____ATGTCGA-3'
B．5-AATTCCATG_____CTGAATT-3'
C．5'-GCAATGCGT_____TCGGGAA-3'
D．5'-TTGATACGC_____CGAGTAC-3'
（5）PCR技术扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列后，扩增产物可用 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳技术进行鉴定。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】Taq酶（或耐高温的DNA聚合酶）；将游离的脱氧核苷酸连到引物的3'端；T-DNA基因两端已知的碱基序列；①④；5′-CTGTC-3′；A；琼脂糖凝胶电泳
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：16引用：1难度：0.5
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1．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
2．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：3引用：3难度：0.7
