生物柴油作为新型能源已经成为世界上应用最广泛、发展迅猛的可再生能源之一。研究人员利用基因工程的方法，将油料作物紫苏的产油基因DGAT1与含有氨苄青霉素抗性基因的pMD克隆质粒构建pMD—DGAT1重组质粒，然后导入大肠杆菌扩大培养；再提取出扩增的pMD—DGAT1克隆质粒，与pBI121空载体同时用XbaI、BamH I两种酶酶切，构建pBI121—DGAT1表达载体：最后将表达载体导入四尾栅藻获得产油微藻，利用地热废水培养产油微藻不仅能生产生物柴油，还能治理地热废水。
（1）提取紫苏组织细胞RNA经过逆转录逆转录得到cDNA，再利用PCR技术扩增得到DGAT1基因。在PCR扩增之前，需要对DGAT1基因进行一次预变性的目的是提高DGAT1基因的变性概率提高DGAT1基因的变性概率；在扩增DGAT1基因时，需要根据DGAT1基因两端核苷酸序列DGAT1基因两端核苷酸序列设计特异性引物序列。
（2）在配制培养大肠杆菌的培养基时，要在培养基灭菌并冷却到30℃左右后，加入用无菌水配制的适宜浓度的氨苄青霉素溶液，氨苄青霉素不能与培养基一同灭菌的原因可能是高温会破坏氨苄青霉素的结构而导致失效高温会破坏氨苄青霉素的结构而导致失效。
（3）将DGAT1基因插入到pBI121空载体的启动子与终止子之间的目的是保证DGAT1基因能在产油微藻细胞中表达保证DGAT1基因能在产油微藻细胞中表达。若用DGAT1基因探针检测产油微藻，能检测到细胞中的DGAT1基因及其转录出的mRNADGAT1基因及其转录出的mRNA；判断产油微藻细胞中DGAT1基因是否成功表达，需要加入DGAT1抗体DGAT1抗体进行检测。
（4）为检测产油微藻对地热废水的去污能力，研究人员设计实验并得到相应实验结果如表。
| 指标 | 总氮（mg/L） | 总磷（mg/L） | 氟化物（mg/L） |
| 废水培养基 | 23.2 | 4.32 | 4.56 |
| 培养转基因产油微藻11天后 | 1.9 | 0.45 | 0.84 |
添加用地热废水培养四尾栅藻的对照组，11天后检测总氮、总磷和氟化物的含量
添加用地热废水培养四尾栅藻的对照组，11天后检测总氮、总磷和氟化物的含量
。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】逆转录；提高DGAT1基因的变性概率；DGAT1基因两端核苷酸序列；高温会破坏氨苄青霉素的结构而导致失效；保证DGAT1基因能在产油微藻细胞中表达；DGAT1基因及其转录出的mRNA；DGAT1抗体；添加用地热废水培养四尾栅藻的对照组，11天后检测总氮、总磷和氟化物的含量
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：24引用：3难度：0.7
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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